基层之免疫学技术.docx

常用免疫学检验技术 理和技术，检查临床标本中的微生物抗原、 肿瘤抗原以及相应的微生物抗体、自身抗 体，为感染性性疾病、肿瘤、自身免疫病 以及免疫缺陷提供诊断依据。 免疫检验分为两个部分，一部分为利用免疫检 测原理检豊 附分子等免疫相关物质，另 一部分是利用免疫检测原理检测体液中微量物 质如激素、酶、血浆微量蛋白、血液药物浓度、微量元素等。这些检测结果为临床上确定诊断、 分析病情、调整治疗方案和判断预后等提供了 有效的实验依据。 第一节免疫学检验原理、特点和方法 （一）抗原抗体?、免疫学检验原理 （一）抗原抗体 口JkBL匕觇可发生在体内,也可发生在体外。在体内 发生的抗原抗体反应即为体液免疫应答的效应作用。体 外的抗原抗体结合反应，根据参与反应的抗原的物理性 状（可溶性或颗粒性）以及参与反应的条件（电解质、 补体等）不同，表现出不同的现象，如沉淀、凝集、细 胞溶解、补体结合和毒素中和等。一般将检查血清中病 原微生物抗原和抗体的试验称为血清学试验。 抗原抗体反应可分为两个阶段。第一阶段为特异 性结合阶段，翌t 出jibwssr第二阶段为可见反应阶段，这 一阶段抗原抗体复合物在适当的电解质、pH、 温度和补体等的影响下，进一步交联聚集，出现 凝集、沉淀、溶解和补体结合介导的生物现象等 肉眼可见的反应。第二阶段反应较慢，往往需要 数分钟至数小时。这两个阶段不能严格划分，所 需的时间也受多种因素的影响。 (二)抗原抗体反应的特点: 1、特异性 —— 抗原抗体反应的特异性(specificity)是指抗原分子上 的抗原决定簇和抗体分子超变区结合的特异性，由这两 个分子之间空间结构的互补性决定的。形同钥匙与锁一 样，所以抗原抗体的结合是有高度特异性的。例如白喉 抗抗毒素只能与相应的外毒素结合，而不能与破伤风外 毒素结合。因此，在抗原抗体反应的免疫学实验中，可 以用已知的抗原或抗体来检测特定的相对应的抗体或抗 原。 2 2、比例性 aTity）是指抗原与抗 性结合反应时，生成肉眼可见结合物的量与反 应物浓度的关系，只有当二者浓度比例适当时, 才出现可见反应。抗原抗体分子比例合适的范 称为抗原抗体反应的等价带。在此范围抗 称为抗原抗体反应的等价带。在此范围抗 原抗体结合充分，沉淀物形成得快而多。 在等价带的前后，由于抗体和抗原的过量，上 物少。当抗体过量时，称为前带，抗原过量时 称为后带。因此，在抗原抗体反应的试验中, 如果没有产生肉眼可见的抗原抗体复合物出现, 一方面要考虑是否有抗原与相应的抗体存在， 另一方面还必须注意到两者反应的比例是否适 当。 3、可逆性抗 3、可逆性 抗JO 臣成复合物后,在一定条 又可解离为游离抗原与抗体的特性称为抗原抗体 结合的可逆性(reversibility) o由于抗原抗体的 结合是分子表面的非共价键结合，故形成的复合 物是不牢固的，在一定的条件下可以解离，所以 说抗原抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一 动态平衡过程。 抗原抗体复合物解离取决于两方面的因素：一是抗体 对相应抗原的亲和力二二 I |山|川I”视丨亍抗原表位在空间构型上非常适合， 两者结合牢固，不容易解离，反之，亲和力低的抗体 与抗原形成的复合物较易解离。环境因素中的过高或 过低均可破坏离子间的静电引力，使抗原抗体的结合 力下降。增加离子强度，也可使静电引力消失，降低 抗原抗体的结合力，促使其解离。解离后的抗原和抗 体仍然保持游离抗原、抗体的生物活性。 （三）影响抗原抗体反应的因素 反应的因忑爭，理 有两方面：一是反应物自身的因素，另一 方面是反应环境的因素。 1、反应物自身因素 抗原的理化性状、表面抗原决定簇的种类和数 目均可影响抗原抗体反应的结果。如颗粒性抗 原与相应抗体结合后产生凝集现象；可溶性抗 原与相应抗体结合后产生沉淀现象；单价抗原 与相应抗体结合后不出现沉淀现象O （2）抗体有差异。家兔等大多数动物的免疫血清，由于具有较宽的等价带,与相应抗原结合易出现可 （2）抗体 有差异。家兔等大多数动物的免疫血清，由于 具有较宽的等价带, 与相应抗原结合易出现可 见的抗原抗体复合物。马、人的免疫血清等价 带窄，抗原不足或过剩，均易形成可溶性复合 物。单克隆抗体一般不适合用于凝集和沉淀反 应。 浓度 抗体的浓度往往是与抗原相对而言，二 特异性和亲和力特异性与亲和力是影响抗原 抗体反应的关键因素，它们共同影响试验结果 的准确程度。诊断试剂应尽可能选高特异性、 高亲和力的抗体，才能提高试验的可靠性。 抗原抗体结合后，由亲水性向疏水性转换过程中必须 要有电解质参与才能进一步使抗原抗体复合物表面失 去电荷，破坏水化层，使复合物相互靠拢聚集，形成 大块凝集、沉淀。若无电解质存在，则不出现可见反 应。在抗原抗体反应中，通常使