动物生物化学 核酸变性与复性 核酸的变性和复性.docVIP

核酸的变性和复性 由于外界理化因素的作用，核酸分子结构中的氢键断裂，从而导致理化性质和生物学功能发生改变的现象，称为核酸的变性作用。 变性是核酸的理化性质之一。核酸的变性是指核酸的双螺旋区的氢键断裂，两条 链相互分开成为单链的现象，它不涉及共价键的断裂。多核苷酸链骨架上共价 （3′,5′磷酸二酯键）的断裂称为核酸的降解。 能够引起核酸变性的因素有： 1）温度升高； 2）酸碱度改变、pH（11.3或4.0）； 3）有机溶剂如甲醛和尿素、甲酰胺等； 4）低离子强度。 当将核酸的稀盐溶液加热80--100℃时，双螺旋结构即发生解体，两条链分开，并形成线团状结构，同时生物学活性也部分或全部丧失，理化性质也发生改变，如OD260值升高，粘度下降，浮力系数增加等。DNA的变性如同固体物质的熔解，是爆发式的，变性作用发生在一个很窄的温度范围内。 通常将50%的DNA变性时的温度称为该DNA的熔点或熔解温度，用Tm表示。DNA的Tm一般在70--80℃之间，主要与以下几个因素有关： 1．DNA的均一性??? 均一性越高的样品。熔解过程越是发生在一个很窄的温度范围内，即Tm的范围越小。 2. G-C的含量??? G-C含量越高，Tm值越高，二者呈正比例关系。这是因为G-C对比A-T对更为稳定的缘故。所以测定Tm值可以推算出G-C对的含量，其经验公式为：G-C％ =（Tm-69.3）×2.44。 3．介质中的离子强度??? 一般说来，在离子强度低的介质中，DNA的熔解温度较低；而在离子强度高的介质中，Tm值则较高。所以，DNA制品应保存在较高浓度的缓冲液或盐溶液中。如常保存在1mol/L NaCl溶液中。 RNA分子中有部分的双螺旋区，所以RNA也可发生变性，但Tm较低。 解开的两条链重新缔合形成双螺旋，称为DNA的复性或退火。 退火温度：比Tm低25℃。 将热变性后的DNA溶液缓慢冷却，在低于变性温度约25～30℃的条件下保温一段时间（退火），则变性的两条单链DNA可以重新互补而形成原来的双螺旋结构并恢复原有的性质。 将变性DNA经退火处理，使其重新形成双螺旋结构的过程，称为DNA的复性。 在适当的条件下，娈性的DNA两条彼此分开的单链又可重新缔合为双螺旋结构，这个过程称为复性。DNA复性后，许多理化性质随之恢复，生物学活性也得到部分恢复。例如，将热变性的DNA骤然冷却时，DNA就不可能复性，但如果缓慢冷却，则可以复性。