DB13∕T 2593-2017 禽腺病毒4型PCR检测方法(河北省).pdfVIP

尬 2017 - 11 - 22 发布 2017 - 12 一 22 实施 发布 河北省质量技术监督局 悖。 11 ρ 卜寸、 !升飞 飞 μ J 、 飞 DB13/T 2593--2017 禽腺病毒4 型 PCR 检测方法 1 范围 本标准规定了禽腺州毒4型PCR检测方法的技术要求。 本标准适用于检测家禽咽喉拭子、月工拭子，发呐禽组织和这些采集样品培养物中的禽腺病毒4型。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件O 2. 1 DNA 脱氧核糖核酸 Cdeoxyribonucleic acid) 2.2 EB 澳化乙链 Cethidium bromide) 2. 3 PCR 聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction) 2.4 dNTP 脱氧核科二酸二磷酸 ( \~ f ;)xy-ri bonucleosi de tri phosphate) 3 试剂或材料 包括各种市售情毒核酸提取试剂盒， l. ú 曾在ι节糖ìJ?，U变， 50XTAE绥忡液，澳化乙提 (EB ， 10 ug/μL) x 或核酸染料，焦碳酸气乙醋 (DEPC) 处理的灭曲的双去Fl 二， DNA分子量标准C100bp) ， 2 TaqMasterMix 或商品化的一步法PCR反应试剂。 警示:电泳中用到的EB在操作中应戴手套和口罩。试验中被EB污染的物品要进行无需化处理; DEPC 在操作中应在通风条件下进行，使用时戴手套和口罩，不小心沾3IJ 皮肤应\. 即冲洗。 3. 1 恼毒核酸提取试剂盒。 3.2 l. 0 %琼脂糖凝胶，配制方法见附录A 中 A. 1o 3.3 50XTAE 绥川液，配制方法见附录A 中 A.20 3.4 泱化乙皖 (EB ， 10 ug/~ L) g~核酸染料，配制方法见附录A 中 A.30 3. 5 焦碳酸一乙醋 (DEPC) 处理的灭曲的现蒸水，配制方法见附录A 中 A.4o DB13/T 2593--2017 3. 6 DNA 分子量标准 (100 bp) 包含 100 bp、 250 bp、 500 bp、 750 bp、 1000 bp , 2000bp 儿种分 子量标准。 3.7 2XTaq MasterMixo 3. 8 商品化的 步法 PCR 反应试剂:含有 PCR 缓冲液、酶混合物、 dNTP 混合物、无 RNA 酶的水寺。 3. 9 引物:上游引物与下游引物见附录B 中的表 B. 1 。引物浓度为 10 IJ mol/L 4 仪器设备 4. 1 PCR 仪:温度范围 4. OC~99. 9C; 样品基座配青主少包括单个 O. 2 日lL 孔。 4. 2 凝胶成像系统:检测灵敏皮 DNA 注0.1 日g; 有效像数 1360 X 1024、 10bit 、 USB 2.0 。 4. 3 台式低温高速禹心机:最高转速 16000 r/mi n; 容量