β淀粉样蛋白对海马神经元线粒体钙库的影响及机制研究.docVIP

β淀粉样蛋白对海马神经元线粒体Ca2+库+的影响及机制研究 摘要： β淀粉样蛋白（β-amyloid peptide，Aβ）在脑内的过度表达、聚集和沉淀呗认为是神经元退行性病变的主要原因。为探讨Aβ在海马神经元细胞内的神经毒性作用及机制，本课题设计了体内实验和体外实验，分别采用实验动物海马内注射和海马神经元细胞原代培养的技术，对实验动物和海马细胞进行染毒。主要研究Aβ对海马线粒体钙库的影响入手，探讨其对学习记忆的关键部位海马的毒性，将对线粒体内钙浓度、膜电位、酶和通道蛋白的表达进行研究。该课题研究将为Aβ神经毒性作用研究增加新的观点，使Aβ的神经毒作用研究更加深入，可以为AD的临床预防和治疗提供有价值的理论参考。尤其在当今日趋老龄化的社会中，揭示Aβ的神经毒性机制对预防和治疗与神经退行性疾病也具有重要的社会意义。 关键词：β淀粉样蛋白；线粒体；Ca2+；海马 立题依据 阿尔茨海默病（Alzheimerdisease，AD）是一种中枢神经系统原发性退行性疾患，临床表现为认识能力下降行为异常及日常生活能力降低，主要病理变化是老年斑（senile plaque，SP）、神经纤维缠结（neuofibrillary tangle，NFT）和神经元缺失[2]等。在人均寿命期望值不断上升的今天，该病已成为危机人类生活质量乃至生命的重要原因。β淀粉样蛋白（β-amyloid peptide，Aβ）是SP的主要成分，它在脑内的过度表达、聚集和沉积被认为是神经退行性病变的主要原因[2]。 为更加有效的预防和治疗AD的发生，各国研究人员对Aβ的产生以及其神经毒性作用进行了深入的研究。研究表明，正常情况下神经细胞可产生低浓度Aβ，Aβ来源于淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein，APP）的水解，它是由39~43个氨基酸组成，是相对分子量约为4200的肽[3]。APP有三种分泌酶水解方式，包括α分泌酶水解、β分泌酶水解、γ分泌酶水解。其中γ分泌酶能水解镶嵌于脂质双分子层内的AβC末端氨基酸之间的肽键，形成长度不等的Aβ片段。Aβ能自发快速聚集形成β-片层折叠结构，进而形成Aβ纤维沉积导致SP发生，所以Aβ是sp的核心物质[4]。Aβ的凝集使其具有神经细胞毒性，可诱导细胞凋亡[5];同时Aβ可激活Tau蛋白激酶，导致Tau蛋白磷酸化，促进双螺旋丝（paired helicalfilament，PHF）和NFT形成，最终导致神经元退行性改变[6]。 对于Aβ神经毒性作用机制的研究表明Aβ的可能参加了细胞凋亡过程，因体内外研究均发现Aβ能下调Bcl-2表达而上调Bax表达，提示Aβ可通过促进Bax的表达进而改变Bax/Bcl-2之间的平衡而导致神经元凋亡[7、8]；Aβ还可激活胶质细胞诱发炎症级联反应，它可将正常情况下的急性反应转变为慢性炎症损伤，小胶质细胞膜上有Aβ和载脂蛋白E(ApoE)受体，使小胶质细胞活化、增殖，并过量分泌细胞因子，介导炎症损伤[9]。同时Aβ本身即可触发氧化应激反应，可能是由于纤维状Aβ自身的肽自由基性质，促使细胞外自由基链反应，引起细胞膜脂质过氧化物增多，破坏细胞膜功能，从而损伤细胞器和细胞骨架，最后导致细胞死亡[10、11]。随着研究的深入，目前发现Aβ可破坏细胞内钙稳态，其可以升高胞内 Ca2+ ，降低膜流动性[12]。国外的研究发现Aβ作用于神经元膜表面的受体，可引起Ca2+内流，认为Aβ与神经元膜表面受体结合，从而穿过脂质双分子层，形成Ca2+通道，有效地转运Ca2+，造成细胞内Ca2+ 增加[13、14] 。此外Aβ能增多IP5,作用于内质网上的IP3受体系统，使内质网释放Ca2+[15] 。Ca2+是维持细胞的兴奋性和递质释放的第二信使，其功能的发挥依赖于正常生理条件下细胞内外Ca2+浓度梯度。而此浓度梯度的维持，有赖于细胞内一系列机制的正常运行。Ca2+浓度梯度变化将引起细胞功能紊乱；钙超载是细胞结构、功能改变以及最后死亡的必需步骤和最终原因。目前对Aβ引起神经细胞内钙稳态改变的具体机制还不是十分清楚，有关Aβ对神经细胞钙稳态的研究，大多集中于对神经细胞内钙浓度的改变[16]和细胞膜表面钙通道的形成和改变上[17],而对于其他可引起神经细胞内Ca2+浓度改变的机制涉及的很少。 在钙稳态的维持通路中，有一比较重要的环节是胞内Ca2+缓冲系统的缓冲作用。一定条件下，质膜上的各种Ca2+离子通道使[Ca2+]i快速升高。如果没有胞内Ca2+缓冲系统的缓冲作用，持续高[Ca2+]i对细胞有极大的危害。可见Ca2+缓冲系统在维持态方面，具有与Ca2+通道同等的重要性。细胞内Ca2+库就是细胞内重要的Ca2+缓冲系统，它是可以吸收和释放Ca2+的细胞器。目前研究较清楚的是线粒