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兰州大学学报 (自然科学版)，1997，33(2)：72～78
JOURNALOFLANZHOU UNIVERSITY (NaturalSciences)
紫外诱变原生质体选育碱性蛋白酶
]，=一] 高产菌株的研究 眨 ．二
‘ 。 Ⅲ
． 诱变株的选育及其产酶条件的研究 l。
薛林贵 冯清平移
(兰而l鲁_生i季~—．,7—3000～0一,兰州)
摘 要 以地表芽孢杆菌(BacillusLicheniformis)53号菌为 出发菌株，在原生质形成和再生的最
佳条件下制备原生质体 ，并对原生质体进行了多次诱变处理 ，从大量突变株进行筛选最终获得了
高产 稳定、耐热的碱性蛋白酶产生菌株 53一G矿6，产酶活力由1l04U／ml提高到22080U．／ml
该诱变株最适产酶条件为：培养基 由质量分数( ／ )为胰蛋白胨 1，酵母膏 0．5，玉米粉5，
NazHPO一·12H O0．4，KH：PO40．03，Na2COa0．1组成，pH 自然，培养温度42c，培养时间44～
48h， ／为 0．2的CaCO。可提高酶的产量．酶作用的最适条件 ：62c，pH 10．0，pH在 9～10之
同稳定．
美键词 地衣状芽孢杆菌 暇 壁 r
中图法分类号 Q933
卟穗毒
碱性蛋 白酶最早发现在猪胰脏 中，1913年Rhom首先将胰蛋 白酶作为洗涤浸泡剂使
用 ．1945年瑞士的Dr．Jagg等发现了微生物碱性蛋 白酶口]，可用于洗涤剂和皮革脱毛，近 20
年来对碱性蛋 白酶的研究更加广泛L3J，主要来源于地衣状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等．目前，
由于市场的需求，酶制剂厂及洗涤剂工业都需要扩大产品品种，并推出耐高温、耐高碱、性能更
好的蛋白酶种类．
对原生质体直接进行诱变处理，从大量突变株中最终选育出一株耐高温、耐高碱的碱性蛋
白酶高产菌株53一G 6．实验证明，对原生质体直接进行诱变处理，可以在较短的时间内筛选
出较理想的菌种．
1 材料和方法
1．1 菌种
地衣状芽孢杆菌BacillusLicheniformis53号由本实验室筛选 ．
1．2 培养基
完全培养基(CM)(w／％) 葡萄糖0．5，蛋白胨 1．0，酵母膏0．5，NaC10．25，pH9．5．
再生培养基(DM ) 参照文献[10]进行．
收稿 日期：1995—12-29．
薛林贵．33岁．男．讲师
④ 甘肃省 自然科学基金资助项 目． @ 通讯喂系^
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第2期 薛林责等：紫外诱变原生质体选育碱性蛋白酶高产菌株的研究 73
斜面培养基( ／％) 牛肉膏 1，蛋 白胨 1，NaC10．5，琼脂 2．pH9．5．
鉴别培养基 参照文献[5]进行．
芽孢培养基 (略)
摇瓶发酵培养基 (w／％) 胰蛋 白胨 1，酵母膏 O．5t玉米粉 5tNa{HPO ·12HzoO-4t
KH2PO 0．03，Na2CO30．1tpH 自然．
酪素琼脂培养基 (W ／ ) 酪素 0．4tCaCI20．0002，MgSO ·7HO0．05，Na2HPO ‘
12H2O0．107，KH2PO 0．036tZnC110．0014tNaC10．O16，FeSO40．0002，酪 素 水 解 液
0、005，琼脂 1．8，pH 10．0．
1．3 试剂
高渗稀释
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