细菌DNA特征序列鉴定法新增.docxVIP

第二次征求意见稿 细菌 DNA特征序列鉴定法（新增） 细菌 DNA特征序列鉴定法系以特征核酸序列作为目标检测物， 用于药用原料、 辅料、制药用水、中间产品、终产品、包装材料和环境等药品全生命周期质量控 制中细菌的鉴定。 本法通过对细菌 16S rRNA 基因特征序列的测定，实现细菌的生物学鉴定。 细菌 16S 核糖体 RNA基因（ 16S ribosomal RNA gene, 16S rRNA 基因）全长约 1500 bp，包含 9 个可变区（ Variable region, V 区）和 10 个恒定区（ Constant region, C 区），在结构与功能上具有高度保守性，是细菌分类和鉴定中得到广 泛应用的 DNA特征序列之一。 实验环境和仪器的一般要求 开展细菌鉴定试验的环境应具备分子生物学实验室的基本条件， 并符合相应 级别的生物安全要求。 所用仪器有电子天平、离心机、冰箱、恒温仪、 DNA定量仪器（如紫外或荧 光分光光度仪） 紫外分光光度仪 ，聚合酶链式反应分析仪（ Polymerase chain reaction analyzer ， PCR仪）、电泳仪、凝胶成像仪、核酸测序仪等。 试剂及其制备方法 三羟甲基氨基甲烷 - 乙二胺四乙酸 二钠缓冲液（ TE 缓冲液， pH 8.0 ） 称取三羟甲基氨基甲烷 12.1 g ，加适量纯化水搅拌溶解，并稀释至 100