薄层板,跑版注意事项.pdfVIP

薄层色谱法跑板 1. 点样 用微量进样器进行点样。点样前，先用铅笔在层析上距末端 2cm 处轻轻画一横线，然后用毛细管 吸取样液在横线上轻轻点样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。如果要重新点样，一 定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样 （用电吹风的热风吹干再点），以免点样斑点过大。一般斑 点直径大于2mm ，不宜超过5mm 。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干。底线距基线 1～2．5cm，点 间距离为lcm 左右，样点与玻璃边缘距离至少lcm ，为防止边缘效应， 2.展开 将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中，由于毛细管作用，展开溶剂在薄层板上缓慢前 进，前进至一定距离后，取出薄层板，样品组分固移动速度不同而彼此分离。 ① 展开室应预饱和。为达到饱和效果，可在室中加入足够量的展开剂，密封室顶的盖。 ② 展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂，并且临用时新配为宜。强烈振摇使混合液充分混匀，放置， 如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配 制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对 不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度，比如：取 1ml 的溶剂，应使用 1ml 的单标移液管， ③ 薄层板点样后，应待溶剂挥发完，再放人展开室中展开。 ④ 展开应密闭，展距一般为 8～15cm。薄层板放入展开室时，展开剂不能没过样点。一般情况下，展 开剂浸入薄层下端的高度不宜超过0.5cm 。 ⑤ 展开剂每次展开后，都需要更换，不能重复使用。（展开缸中得展开剂弃去，密封在容量瓶中得展开 剂可在当天使用） ⑥ 展开后的薄层板用适当的方法，使溶剂挥发完全，然后进行检视。 ⑦ Rf 值一般控制在0.3～0.8 ，当Rf 值很大或很小时，应适当改变流动相的比例。 3.斑点的检出 展开后的薄层板经过干燥后，常用紫外光灯照射或用显色剂显色检出斑点。对于无色组分，在用显色 剂时，显色剂喷洒要均匀，量要适度。紫外光灯的功率越大，暗室越暗，检出效果就越好。 展开分离后，化合物在薄层板上的位置用比移值(Rf 值)来表示。化合物斑点中心至原点的距离与溶剂 前沿至原点的距离的比值就是该化合物的Rf 值。 注意事项： 一．预饱和分为2 部分： 1、展开缸的预饱和：在展开之前，使展开剂蒸汽在展开缸内饱和，使展开缸汽液状态达到一定的稳定 状态，此时尚未放薄层板。 2、薄层板的预饱和：在展开缸饱和后，放入已经点样完毕的薄层板，进行饱和，使薄层板整体差异性 减小。具体做法是：在双槽层析玻璃缸内,将其中一个槽内倒入配好的展开剂,另一个槽内放入薄层板,盖 好上面的玻璃盖,这时候就是在预饱和。 关于饱和时间：根据展开剂而定。 1、展开剂组分极性差异不大的且挥发性好的，时间可以短一些，一般15－20 分钟即可； 2、极性差异大的，且挥发性差异大的，时间要长一些，一般要30－60 分钟； 3、极性差异大的，且挥发性差异不大的，时间要长一些，一般要20 －30 分钟； 4 、极性差异不大，且挥发性差不大的，时间可以短一些，一般要10－15 分钟； 5、水饱和有机试剂或有机试剂饱和水的，时间一般都比较长，30－60 分钟。 6、另外，大家打开关闭展开缸的速度要快，放板取板的速度也要快，否则预饱和的效果全被你后期的 操作给抹杀了！！ 1 二．展开室应放在水平、稳定的实验台上，不能有阳光直射，也不能在通风处放置，离开热源，避免温 度波动对分离不利；光敏物质的分离应将展开室置于暗处进行。 三．点样时间不应超过三分钟。硅胶的硅醇基以氢键形式优先吸附水，物理吸附使硅胶的活度降低，影 响了弱极性物质的吸附，化合物的 Rf 值相应地增大。硅胶薄层的吸水速度很快，当用预先经过活化的 薄层板，在点样过程中干燥的薄层会立即吸附空气中的水蒸气，在数分钟内达到平衡，吸附水蒸气的量 决定于点样速度即暴露在空气中的时间和空气的相对湿度。Dallas 指出0.25mm 厚、20cm×20cm 的硅胶 薄层板在50%相对湿度中放置约3min 就失去活性的一半，而放置15min 时吸附的水分已达到最大值。 在用相同条件分离同一组化合物得到的结果不能重现时，必须考虑到相对湿度对展开的影响，特别是我 国南北地区湿度相差很大；即使在同一实验室冬夏季节不同湿度也有明显差别，如果不注意湿度的影响