健康恒河猴和食蟹猴毛发微量元素与氨基酸的检测研究.docxVIP

健康恒河猴和食蟹猴毛发微量元素与氨基酸的检测研究      　　灵长类动物是现代生物医学研究中重要的实验动物之一。但在人工饲养条件下, 营养状况和寄生虫、皮肤真菌等干扰导致恒河猴和食蟹猴毛发品质出现差异。毛发质量不仅影响外观, 而且能反映实验动物的品质。本文通过对健康的成年恒河猴和食蟹猴毛发中氨基酸和微量元素进行测定分析, 以评估恒河猴和食蟹猴的健康状况。  　　1、材料和方法 　　1.1、材料 　　1.1.1、实验动物: 　　实验动物来自于云南中科灵长类生物医学重点实验室[SCXK (滇) K2017-0001]饲养的24只5~10岁相同饲养环境条件下的健康恒河猴和食蟹猴。 　　1.1.2、仪器设备: 　　日立L-8900高速氨基酸分析仪, 色谱柱 (2622#PH离子交换色谱柱4.5times;60mm) , 电感耦合等离子质谱仪 (ICP-MS安捷伦7500ce) , 微波消解仪 (奥地利安东帕Anton Paar MW3000) 。 　　1.2、方法 　　1.2.1、动物挑选: 　　挑选毛色均匀有光泽、体格发育良好且未有体表寄生虫的健康恒河猴 (雄性、雌性各6只) 和食蟹猴 (雄性、雌性各6只) 共24只。 　　1.2.2、取样: 　　用毛剪取试验猴头部、背部、四肢被毛, 每只取样品30g, 装入自封袋中送检。 　　1.2.3、被毛样品处理: 　　测定氨基酸及微量元素前, 先将收集的被毛充分混匀后用洗洁精清洗, 再用清水漂洗干净, 自然风干, 装样品袋封存待用[1]。 　　1.2.4、氨基酸含量测定: 　　取一定质量的样品于20mL水解管中, 加入16mL、6 moL/L的盐酸溶液, 真空脱气30min, 充氮封管, 在110℃下水解22~24h, 取出冷却开管, 用去离子水无损转移到50mL容量瓶中, 并定容。准确取1mL水解液于小瓶中, 于真空中脱酸抽干, 加1 mL水再抽干, 再加1mL水再抽干备用。上机前准确加入1 mL0.02mol/L的盐酸溶液, 充分溶解, 用0.22mu;m的水相膜滤膜过滤上机分析[2]。 　　1.2.5、微量元素测定: 　　(1) 微波前处理方法:准确称取0.1g样品, 置于洗净的聚四氟乙烯 (PTFE) 消解罐中, 加入硝酸4 mL、氢氟酸2 mL、硫酸2mL, 加盖密封, 运行微波消解程序。待消解完成后, 取消解罐置电加热器上, 于200℃缓缓加热至红棕色蒸气挥尽, 并继续浓缩至1~2mL放冷, 将样品转移至干净的聚酯 (PET) 塑料瓶中, 用2%的稀硝酸稀释定重值50.00g。空白对照同法处理。 (2) 微波消解条件:微波消解条件及程序见表1。 (3) ICP-MS工作条件:ICP-MS主要工作条件参数见表2。 表1 微波消解程序 (