基于转录组测序技术对人宫颈癌Hela细胞阿霉素获得性耐药机制的研究.pdfVIP

摘要 在全球范围内，宫颈癌的发病率仅低于乳腺癌，它在女性癌症中名列第二，极大 地损害了女性的健康。目前化疗是宫颈癌最常见的治疗选择之一，特别是在中晚期宫 颈癌的治疗中起着重要作用。作为一种高效的广谱抗癌药物，阿霉素独自或与联合其 他抗肿瘤药物对宫颈癌的治疗有较好的效果，是一种较强力的化疗药物。而化疗过程 中产生的阿霉素耐受现象是影响患者临床化疗治愈率的重要因素之一，但其分子机理 还没有完全查明。 因此本课题采用人宫颈癌 Hela 细胞以及体外构建的宫颈癌阿霉素耐药细胞 Hela/Dox 作为试验模型，利用转录组测序技术对宫颈癌 Hela 细胞及其相应的阿霉素 耐药细胞Hela/Dox 进行测序，从而得到两个转录本之间差异表达的基因，再结合GO、 COG、KEGG 三大数据库的注释结果以及相关文献，能够比较全面的获得该细胞中的 基因功能及其结构，探寻与宫颈癌阿霉素获得性耐药相关的靶基因和信号通路，从而 筛选出宫颈癌阿霉素耐药发生过程中的分子靶标。最后我们利用 RNA 干扰技术对分 析所得的与宫颈癌阿霉素耐药相关的基因进行敲减，进一步证实该靶标对阿霉素获得 性耐药中的作用。 通过转录组测序共获得2562 个差异基因，其中有1269 个基因在Hela/Dox 细胞样 本中表达为上调，1293 个基因在Hela/Dox 细胞样本中表达为下调。并且KEGG 的注 释结果表明富集差异基因最多的通路有 Pathways in cancer 、P13K-Akt 、MAPK 、 HTLV-1 infection pathway、Rap1 、Proteoglycans in cancer 等，推测这些信号途径可能 参与人宫颈癌阿霉素耐药形成过程。我们选取基因表达差异倍数在前100 的基因，将 之对应在KEGG 通路中，发现只有39 个基因可以对应至相应的通路中，再查阅诸多 文献的研究结果，发现 WNT10B 这个基因可能与人宫颈癌 Hela 细胞阿霉素耐药机制 相关。因此我们选择 WNT10B 基因作为后续实验的主要研究对象，当利用干扰 RNA 敲减Hela/Dox 细胞株中的 Wnt10B 基因后， Hela/Dox 细胞对阿霉素的药敏性得到明 显增强，敲除前后Hela/Dox 细胞的耐药指数是1.37，对其耐药性有一定的缓解作用。 以上结果表明，Wnt10B 基因在控制Hela 细胞阿霉素耐药过程中起着关键性作用，为 I 宫颈癌的化疗耐药奠定了理论基础，同时也给宫颈癌的精准治疗提供了新的方向。 关键词：宫颈癌，阿霉素耐药，转录组测序，Wnt10B II 目 录 摘要I Abstract III 缩略语对照表V 第一章 引言 1 1.1 宫颈癌简介 1 1.2 宫颈癌的发病高危因素2 1.3 宫颈癌的分类3 1.4 宫颈癌的治疗3 1.4.1 手术治疗3 1.4.2 放射治疗4 1.4.3 化学疗法4 1.4.4 基因治疗5 1.5 阿霉素及其耐药机制5 1.5.1 阿霉素简介5 1.5.2 阿霉素耐药机制6 1.6 转录组测序9 1.6.1 转录组测序技术简介9 1.6.2 RNA-Seq 在肿瘤中的应用 10 1.7 研究目的与意义 10 第二章 材料与方法 13 2.1 材料 13 2.1.1 实验细胞株 13 2.1.2 实验试剂及耗材 13 2.1.3 实验仪器 14 2.1.4 主要试剂配制及实验准备 16 2.2 方法 16