动物源性食品中喹诺酮类物质的快速检测胶体金免疫层析法(kj201906).docxVIP

附件 6 动物源性食品中喹诺酮类物质的快速检测胶体金免疫层析法 (KJ201906) 范围 本方法规定了动物源性食品中喹诺酮类物质的胶体金免疫层析快速检测方法。 本方法适用于生乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳、猪肉、猪肝、猪肾中洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、达氟沙星、二氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、氟甲喹、噁喹酸残留的快速测定。 原理 本方法采用竞争抑制免疫层析原理。 样品中的喹诺酮类物质与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和检测线（ T 线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化，通过检测线与控制线（ C 线）颜色深浅比较，对样品中喹诺酮类物质进行定性判定。 试剂和材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的二级水。 3.1 试剂 3.1.1 乙腈。 3.1.2 甲酸。 3.1.3 分散 固相萃取剂 I：分别称取硫酸镁 18 g、醋酸钠 4.5 g 放于研钵中研碎 。 3.1.4 分散 固相萃取剂 II ：分别称取硫酸镁 27 g、N- 丙基乙二胺（ PSA）4.5 g 放于研钵中 研碎 。 3.1.5 甲酸 -乙腈溶液： 98 mL 乙腈中加入 2 mL 甲酸，混匀 。 3.1.6 甲醇。 3.1.7 稀释液：脱脂奶粉︰水（ 1︰ 10）。 3.2 参考物质 喹诺酮类参考物质的中文名称、英文名称、 CAS 登录号、分子式、相对分子量见表 1， 纯度 ≥99%。 表 1 喹诺酮类参考物质的中文名称、英文名称、 CAS 登录号、分子式、相对分子量 序号 中文名称 英文名称 CAS 登录号 分子式 相对分子量 1 洛美沙星 Lomefloxacin 98079-51-7 C17H 19F2N 3O3 351.35 2 培氟沙星 Pefloxacin 70458-92-3 C17H20FN 3O3 333.36 3 氧氟沙星 Ofloxacin 82419-36-1 C18H20FN 3O4 361.37 4 诺氟沙星 Norfloxacin 70458-96-7 C16H18FN 3O3 319.33 5 达氟沙星 Danofloxacin 112398-08-0 C19H20FN 3O3 357.38 6 二氟沙星 Difloxacin 5522-39-4 C28H33N 3F2 449.58 7 恩诺沙星 Enrofloxacin 93106-60-6 C19H22FN 3O3 359.16 8 环丙沙星 Ciprofloxacin 85721-33-1 C17H18FN 3O3 331.13 9 氟甲喹 Flumequine 42835-25-6 C14H12FNO 3 261.25 10 噁喹酸 Oxolinic Acid 14698-29-4 C13H11NO5 261.23 注：或等同可溯源物质。 3.3 标准溶液的配制 3.3.1 喹诺酮类物质标准储备液 （ 1 mg/mL ）：分别精密称取喹诺酮类参考物质 （ 3.2）适量， 置于 50 mL 烧杯中，加入适量甲醇（ 3.1.6）超声溶解后，用甲醇转入 10 mL 容量瓶中，定 容至刻度，摇匀，配制成浓度为 1 mg/mL 的喹诺酮标准储备液。 -20℃避光保存，有效期 6 个月。 3.3.2 喹诺酮类物质标准中间液 （ 1 μ g/mL）：分别吸取喹诺酮类标准储备液 （ 1 mg/mL ）（ 3.3.1 ） 100 μL于 100 mL 容量瓶中，用甲醇（ 3.1.6）稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为 1 μ g/mL的 喹诺酮类标准中间液。 3.4 材料 3.4.1 金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。 3.4.2 试剂条或检测卡。 仪器和设备 4.1 μ μ 移液器： 100 L 、 200 L 和 1 mL 。 4.2 涡旋混合器 。 4.3 离心机： 转速 ≥4000 r/min 。 4.4 电子天平： 感量为 0.01 g。 4.5 孵育器： 可调节时间、温度，控温精度 ±1℃。 4.6 读数仪。 4.7 氮吹仪。 4.8 环境条件：温度 15℃～ 35℃，湿度 ≤80%（采用孵育器与读数仪时可不要求环境温度）。 分析步骤 5.1 试样制备 液体乳直接用于测定，猪肉、猪肝、猪肾用组织捣碎机等搅碎后备用。 5.2 试样的提取 5.2.1 生乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳 分别吸取同等体积的液体乳样品与稀释液混合后为待测液。 5.2.2 猪肉、猪肝、猪肾 准确称取 2.5 ±0.01 g 均质后的组织样品于 15 mL 离心管中，加入 5 mL 甲酸 -乙腈溶液 3.1.5 ），涡旋混合 1 min ，振荡 5 min ，4000 r/min 离心 5 min。将上清液