两种小分子信号肽调控植物根系生长发育与矿质吸收的初步研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 植物中数以千计的小分子信号肽（SSPs ）在调控植物生长发育和防御反应等 诸多方面发挥着重要作用，也被称为植物多肽激素。但目前只对很少一部分进行 过初步研究，对其相关基因及作用机制知之甚少。因此，鉴定植物 SSPs、发掘相 关功能基因、解析其作用机制、探索其在作物生产中的应用潜力具有重要的理论 与实践意义。本文应用人工合成的特定 SSP 或保守序列短肽，对其在调控拟南芥 根系生长发育与矿质吸收等方面的功能和应用潜力进行了初步研究，取得如下研 究结果： 1. 本文在本实验室的前期研究基础上，验证了人工合成仅含 7 个氨基酸残基 （YIYEVAK ）的短肽BIN7 具有在低浓度时调控拟南芥根系生长发育的功能。发 现 BIN7 对拟南芥根系的生长存在类似于植物激素的低浓度促进和高浓度抑制现 象。为鉴定相关SSPs 的功能基因，以拟南芥EMS 诱变群体为材料，用系列BIN7 浓度的MS 培养基从EMS 诱变群体中筛选根系对BIN7 不敏感的突变体，初步获 得2 个稳定的不敏感株系，并分析了BIN7 不敏感突变体对BIN7 的响应情况。为 进一步克隆相关功能基因奠定了基础。 2. 人工合成了凯氏带完整性因子保守序列 RPPFKLIPN 的短肽（CIF ），用低 浓度CIF 短肽处理拟南芥幼苗和根系，用激光扫描共聚焦显微镜结合PI 染色观察 了凯氏带的形成情况，发现该短肽处理后内皮层凯氏带较为发达和完整。采用 ICP-MS 分析发现 CIF 短肽对拟南芥多种矿质元素吸收积累具有显著影响。采用 RT-qPCR 方法发现CIF 短肽处理对多个离子吸收转运体基因表达具有显著影响。 3. 利用合成的BIN7 和CIF，分析了其对水稻和油菜生长发育的影响。水稻种 子和油菜种子浸种试验发现，用低浓度（10 μM）BIN7 浸种明显促进种子的萌发， 但用低浓度（0.1 μM ）CIF 浸种影响不大。培养基添加低浓度的BIN7 可促进水稻 幼苗和油菜幼苗根系和茎叶生长，而添加高浓度（300 μM ）的BIN7 则抑制幼苗根 系和茎叶生长。在营养液中添加低浓度（0.1 μM ）的CIF，对水稻幼苗新生根的生 长没有明显影响。 本文关于BIN7 和CIF 两种植物小分子信号肽的研究结果，为进一步鉴定相关 功能基因、解析其调控根系生长发育和矿质吸收的功能和在作物生产实践中探索 新的调控手段和制剂产品提供了有益参考。 关键词：小分子信号肽；生长发育；根；矿质元素；吸收 I 目 录 目 录 第1 章 前言 1 1.1 问题的提出 1 1.2 选题背景及意义 1 1.3 文献综述 2 1.3.1 植物小分子信号肽及其种类 2 1.3.2 植物小分子信号肽的分子结构 3 1.3.3 植物小分子信号肽前体与加工 4 1.3.4 植物小分子信号肽的生理功能 5 1.3.5 植物小分子信号肽的作用机制 7 1.3.6 植物小分子信号肽的实用价值 9 1.3.7 植物小分子信号肽的研究技术 10 1.4 本文的研究思路与技术路线 10 1.5 本文的章节结构11 第2 章 实验材料与方法 12 2.1 实验材料 12 2.2.1 植物材料 12 2.2.2 人工合成短肽 12 2.2.3 分子生化试剂 12 2.2 实验仪器 12 2.3 实验方法 13 2.3.1 拟南芥种子EMS 诱变 13 2.3.2 BIN7 不敏感突变体的筛选 13 2.3.3 BIN7 不敏感突变体的表型鉴定 14 2.3.4 BIN7 不敏感突变体纯合子