谷氧还蛋白敲除缩短酿酒酵母时序寿命的研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 当今社会，人口老龄化问题日益显著，人们对于衰老过程的研究有了越来越 多的关注。Reactive oxygen species （ROS ）是一类与衰老及衰老相关疾病的发生发 展有着紧密联系的分子。随着生物体不断生长，ROS 会逐渐积累，造成机体损伤 并导致衰老相关疾病的发生。谷氧还蛋白是一类小分子氧化还原蛋白，它们在细 胞抗氧化系统中起着重要的作用。谷氧还蛋白可以使用GSH 作为电子供体，催化 蛋白及低分子量二硫化物的还原，从而调控蛋白的功能或者活性。酿酒酵母是研 究衰老过程最重要的模式生物之一，其有两个典型的二巯基谷氧还蛋白：定位于 细胞质的Grx1 和定位于细胞质及线粒体的Grx2 。研究表明，在小鼠组织中，谷氧 还蛋白的表达量和活性随着年龄的增长而下降，且线粒体中的谷氧还蛋白对衰老 过程有着重要影响。因此，探究谷氧还蛋白对于酿酒酵母衰老过程的影响，可以 揭示衰老发生发展的分子机制。 本课题系统分析了谷氧还蛋白敲除对酿酒酵母时序寿命（CLS ）的影响及其作 用机制。我们发现谷氧还蛋白敲除能够导致酿酒酵母CLS 明显缩短。为了探究其 作用机制，我们应用定量蛋白质组学的方法，鉴定了谷氧还蛋白敲除的酿酒酵母 和野生型酿酒酵母之间的差异表达蛋白，并根据组学结果推测谷氧还蛋白敲除激 活了酿酒酵母的Ras-PKA 通路。通过检测酿酒酵母Ras-PKA 通路相关的表型变化， 我们验证了谷氧还蛋白敲除能够导致酿酒酵母Ras-PKA 通路激活的假设。而利用 过表达抑制蛋白的方法降低Ras-PKA 通路的活性后，谷氧还蛋白敲除的酿酒酵母 的 CLS 能够得到明显延长。最后，我们研究了谷氧还蛋白敲除引发酿酒酵母 Ras-PKA 通路激活的作用机制，发现谷氧还蛋白敲除会引起细胞内ROS 水平上升， 导致细胞内pH 下降，从而激活酿酒酵母的Ras-PKA 通路。而Ras-PKA 通路的激 活降低了酿酒酵母的抗逆能力，使酿酒酵母无法适应环境的压力，导致其CLS 的 缩短。 综上所述，本课题利用定量蛋白质组学与表型实验相结合的研究方法，揭示 了谷氧还蛋白敲除导致酿酒酵母CLS 缩短的作用机制，为衰老相关的研究提供了 思路与研究方向。 关键词：时序寿命；谷氧还蛋白；活性氧；Ras-PKA 通路；胞内pH I 目 录 目 录 第1 章 前言 1 1.1 问题的提出 1 1.2 选题背景及意义 1 1.3 文献综述 2 1.3.1 ROS 对衰老及衰老相关疾病的影响 2 生物体中ROS 的形成与组成 2 ROS 对衰老影响的相关研究 3 ROS 与疾病的相关研究 4 1.3.2 谷氧还蛋白的相关研究 5 谷氧还蛋白概述 5 谷氧还蛋白作用机理 5 谷氧还蛋白具有去谷胱甘肽化功能 6 谷氧还蛋白在不同物种中的组成与分布 7 酿酒酵母谷氧还蛋白 8 1.3.3 酿酒酵母衰老过程的相关研究 10 酿酒酵母基本信息 10 酿酒酵母的衰老模型11 酿酒酵母衰老模型的应用 12 1.3.4 定量蛋白质组学技术 12 蛋白质组学的基本概念 12 蛋白质组学的离子化方法 12 蛋白质组学实验方法 13 定量蛋白质组学的定量方法 14 1.3.5 酿酒酵母Ras-PKA 通路 15 Ras-PKA 通路基本信息 15