大肠杆菌入侵土壤的机制及其与土著微生物的互作关系.pdfVIP

摘要 全球畜禽养殖业的发展产生了大量的畜禽粪便，其中未经有效灭菌的畜禽粪 便直接作为有机肥料施用于农田系统中可造成病原微生物污染，可迁移至水体、 蔬菜、动物体内等，进而引发人类或其他动物的疾病传播、暴发。大肠杆菌 O157:H7 是一种常见的人畜共患的病原微生物，10 个细胞量即可导致人体感染， 可对人体造成严重的并发症。土著微生物作为土壤生命的重要组成部分，种类繁 多、数量庞大且功能多样，可在土壤受到外来微生物入侵时作出响应。因此了解 大肠杆菌 O157:H7 入侵后与土著微生物的互作以及该菌携带的毒素基因对群落 的影响，将有助于了解土壤生物污染的机理和效应，为探究其治理方案奠定理论 基础，对深入理解“土壤健康”、“土壤微生态安全”具有重要的意义。本论文通 过实验室内培养实验，研究了不同土壤类型及外源底物添加对土壤中大肠杆菌 O157:H7 存活时间的影响及主要的驱使因子，阐明了大肠杆菌 O157:H7 入侵后 对土著群落的遗留效应及关键影响因子，揭示了土著群落受外来微生物入侵时的 群落功能层面的响应以及特异微生物的筛选、互作效应等。主要研究结果如下： (1) 土壤性质对大肠杆菌O157:H7 存活的影响。在土壤的非生物、生物因素 中，pH 值、微生物多样性以及资源可利用性是大肠杆菌存活的重要驱动因素。 随着土壤pH 值的升高（4.30 ±0.55 至7.23 ±0.12），大肠杆菌O157:H7 存活时间 增长；土著微生物多样性越高，大肠杆菌 O157:H7 的存活时间越短；土壤的资 源可利用性越高，大肠杆菌 O157:H7 存活时间越长。此外，毒素基因对大肠杆 菌 O157:H7 的入侵存活时间有显著影响，携带所有毒素基因的菌株存活时间最 短 （最低为砖红壤4.59 ±0.13 天），无毒菌株存活时间最长 （最高为棕壤 118.34 ±2.38 天）。养分输入可导致土著群落与入侵微生物之间的资源竞争等相互关系 发生改变，最终提高大肠杆菌O157:H7 的入侵率。 (2) 大肠杆菌O157:H7 入侵对土壤群落稳定性的影响机制。高通量测序以及 Biolog 分析结果表明，大肠杆菌 O157:H7 入侵后对土著微生物的组成、结构、 碳源利用能力以及群落生态位等产生了遗留效应。大肠杆菌 O157:H7 入侵后， 土著生态位显著增加 （10-1 群落增加约 1.13 倍，10-6 群落增加约3.66 倍），群落 的代谢能力发生变化，携带不同毒素基因的大肠杆菌 O157:H7 菌株入侵后对土 著群落的影响不同，携带所有毒素基因的菌株入侵后土著群落受到病原微生物入 III 侵后恢复较快，而无毒菌株入侵后土著群落在监测时间范围内 （120 天）未观察 到显著的恢复。统计分析结果显示，大肠杆菌 O157:H7 的存活时间与所有土壤 处理组的群落变化Bray-curtis 距离呈显著正相关，表明大肠杆菌O157:H7 入侵 对土著微生物的影响主要取决于其在土壤中的存活时间。 (3) 大肠杆菌O157:H7 入侵对土著微生物稳定性的影响机制。通过伽马辐照 灭菌处理探究了大肠杆菌 O157:H7 的存活时间及其与土著微生物的响应。结果 表明，大肠杆菌 O157:H7 的存活与土著微生物之间的竞争密切相关，大肠杆菌 O157:H7 入侵能显著改变土壤有机碳的矿化速率 （灭菌土壤提高约1.26 倍，自 然土壤提高约1.30 倍），外来碳源的添加可显著提高土壤的呼吸作用，且对伽马 灭菌土著微生物的恢复有着显著的影响。由此可知，土著微生物在抵抗外来微生 物入侵过程中起着重要的作用。 (4) 微杆菌 Microbacterium foliorum （M. foliorum ）对土壤中大肠杆菌 O157:H7 存活时间的影响。从土著微生物中筛选出40 株基因型与功能型不同的 土壤细菌，进一步探索大肠杆菌 O157:H7 与土壤细菌间相互作用的可能性。研 究发现微杆菌M. foliorum 与大肠杆菌O157:H7 在单独培养状况下均无法利用纤 维二糖，而在共培养体系中可直接利用纤维二糖进行细胞增殖，但该共培养体系 不能增加大肠杆