DB37_T 4298—2020绿潮次生毒性的快速检测方法 发光细菌法.docxVIP

ICS07.060CCSA 45 ICS 07.060 CCS A 45 山 东 省 地 方 标 准 DB37/T 4298—2020 绿潮次生毒性的快速检测方法 发光细菌 法 Rapid determination for secondary toxicity of green tide—Luminescent bacteria method 2020 - 12 - 30 发布 2021 - 01 - 30 实施 山东省市场监督管理局 发 布 DB37/T 4298 DB37/T 4298—2020 I I 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由山东省海洋局提出并组织实施。 本文件由山东省海洋标准化技术委员会归口。 PAGE PAGE 6 绿潮次生毒性的快速检测方法 发光细菌法 范围 本文件规定了以一种发光细菌-费氏弧菌（Vibrio fischeri）为受试生物的绿潮次生毒性快速检测与毒性水平评价方法。 本文件适用于绿潮发生海域绿潮藻腐烂液次生毒性的检测。 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 绿潮次生毒性 secondary toxicity of green tide 绿潮藻腐烂分解产生的物质对生态环境产生的影响及损害的能力。 3.2 光抑制率 light inhibition rate 水样在一定的时间和条件下与发光细菌接触后，发光细菌的发光量降低的百分比。 3.3 光增益率 light gain rate 水样在一定的时间和条件下与发光细菌接触后，发光细菌的发光量增加的百分比。 3.4 半数效应浓度 median effect concentration 样品在一定的时间和条件下与发光细菌接触后，发光细菌的发光量减少50 %时的样品浓度。 3.5 水合 reconstitution 处于冷藏环境的发光细菌冻干粉加入一定量的稀释剂恢复至活性。 3.6 水合时间 reconstitution time 添加稀释剂的发光细菌恢复至活性所需要的时间。 3.7 反应时间 reaction time 恢复至活性的发光细菌与对照样本或者待测样本接触的时间。 方法原理 发光细菌在一定实验条件下的发光强度是稳定的。在一定绿潮次生污染物范围内，发光细菌接触样品后的发光强度与样品的急性毒性水平呈显著负相关（P≤0.05），通过分析仪测定细菌发光强度的变化以表示样品的急性毒性水平。 试剂与材料 发光细菌冻干粉 本文件使用的发光细菌菌株为费氏弧菌（Vibrio fischeri NRRL B-11177）。冻干粉应在-20 ℃～ -25 ℃储存，4 ℃时，保存时间不超过4周；22 ℃时，不超过24 h。 稀释剂 稀释剂为2 %氯化钠溶液，用作水合发光细菌冻干粉、稀释样品以及无毒对照样本。2 ℃～8 ℃保存。宜选用与冻干粉相应的稀释剂。 参比毒物母液 称取0.05 g七水合硫酸锌（ZnSO4?7H2O、分析纯）溶解于稀释剂中，定容至500 mL，即为参比毒物母液（100 mg/L）。母液密封4 ℃保存，保存期不超过6个月。 参比毒物标准液 按照等差、等比倍数相结合的方式，采用梯度稀释法将参比毒物母液依次稀释至6 mg/L、4 mg/L、2 mg/L、1 mg/L、0.5 mg/L和0.25 mg/L，用于测定发光强度并制作标准曲线。标准液应现用现配。 仪器设备 仪器和设备如下： —— 生物毒性分析仪； —— 温度计：－5 ℃～+40 ℃； —— 离心机：5 000 r/min； —— 电子天平：感量 0.00 1 g。 样品的采集、保存和预处理 样品的采集 参照GB 17378.3的规定，溶解氧、生化需氧量样品采集时应防止搅动水体，水样不应曝气。避免采集漂浮物，水样充满样品瓶，并记录当时现场的水温。样品瓶采用经过灭菌的50 mL棕色玻璃瓶。样品信息采集表参见附录A。 样品的保存 样品采集后宜在现场尽快进行毒性测定。若在实验室内测定，样品4 ℃保存，24 h内测定；不能在24 h内测定的，转入50 mL冻存管内，于-20 ℃避光保存，1周内测定。 样品的预处理 浑浊的样品应通过沉淀或使用离心机以5 000 r/min，离心1 min后，取上清液进行毒性测试。 样品的检测 实验室温度的校正 实验室检测时，调节室内温度与采样地温度接近。温差控制在±2 ℃。 样品管的准备 根据样品数量，准备相应数量的测试管：对照样品管2×3个（3个重复），待测样品管2 n×3个(n: 样品数量)