新基因功能研究的策略与方法(详解).pptVIP

;随着生命科学的发展及研究领域的不断开拓和生物医学研究在分子水平上的不断深入和推进，越来越多的未知新基因和基因的新功能被发现,越来越多的新基因被得以成功克隆，因此对新基因功能的研究显得日益重要，这也是后基因组时代功能基因组学的重要研究内容和首要任务。 ;一.新基因的生物信息学及体内表达规律分析; 二.新基因的体内表达规律分析 三.功能获得与功能失活策略研究; 四.功能失活策略 五.基因编码产物相互作用蛋白的研究 ; 目前，生物信息学分析已成为新基因功能研究首选和必用方法，其具有方便快捷和经济等优点。研究者往往可以从中得到与新基因功能有关的重要信息，初步推测基因的可能功能，进而制定出进一步的实验室研究方案。 （1）编码产物预测分析 （2）序列同源性分析 （3）蛋白质功能域分析 ;（1）mRNA水平的表达谱分析； （2）蛋白质水平的表达分析。;三.功能获得策略;四.功能失活策略;五.基因编码产物相互作用蛋白的研究; 研究者往往最开始得到有价值的EST序列，进而通过电子延伸或和相关实验方法获取其全长cDNA序列。这种情况下，首先要进行即是进行全长cDNA序列的开放阅读框查找，推导其编码蛋白质的氨基酸序列。 然后，进行信号肽序列预测分析。初步判定其亚细胞定位，再进行蛋白质的基本理化性质分析，包括氨基酸组成、分子质量、等电点、亲/疏水性等。最后，以已知的氨基酸序列的基础，分析预测其高级结构。 ;规律分析;;序列及其染色体定位信息，而无需进行荧光原位杂交等基因染色体定位技术，进而还可通过分析其内含子、外显子序列及其调节位点，推测其可能的基因表达调控方式。即通过此法确定了富含亮氨酸重复序列蛋白新基因的基因组DNA序列及其染色体定位。; 主要是通过联网或数据库行蛋白质是基因功能的体现者和施行者，而蛋白质的结构则是蛋白质执行生物学功能的基础，因此对新基因所编码蛋白质的功能域分析将对推测新基因功能提供极其有价值的信息。目前，已经有大量被发现的蕴藏于蛋白质结构中的与特定生物学活性相关的所谓保守模体。;蛋白质的结构功能域分析;mRNA水平的表达谱分析;蛋白质的水平表达分析;;基因转染技术; 如经典的RAS癌基因的功能即通过转染NIH-3T3细胞而得以鉴定目前常用的基转染系统分为非病毒性表达系统和病毒性表达两种，非病毒性表达载体目前主要采用质粒，通过脂质体介导、电穿孔等方法使目的基因被宿主细胞摄取，然而，尽管这类表达系统具有操作简便、经济等优势，其也有不少局限性，主要问题是，不同细胞类型对外源DNA的摄取能力有所不同，尤其在初级未转化的细胞中几乎是无效的，而初级细胞对于观察基因的细胞转化活性等行为恰恰非常有用。然而，病毒性载体，尤其是逆转录病毒载体的使用却能够很好的解决此问题，这类以病毒为载体介导的基因转移因其具有转染效率高、目的基因可稳定表达等优势而被广泛应用。 ;转基因技术;;基因沉默技术;基因敲除;;免疫共沉淀技术; 免疫共沉淀是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。 该方法的优点是：相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，所处的环境条件也是接近天然状态的，能够反映体内的相互作用情况，也可以分离到天然状态的相互作用蛋白复合物。但应该注意，有时免疫共沉淀的蛋白质并非是直接相互作用，如ElA与p107的共沉淀就是间接的相互作用，这实际上是ElA与p107、p107与cyclin A直接相互作用的结果。另外，其灵敏度也相对较低。;酵母双杂交系统;;此课件下载后可自行编辑修改 关注我 每天分享干货