植物胚胎培养解析.ppt

（ 2 ）防止幼胚早熟萌发的方法 ①提高培养基渗透压。 胚龄越小要求的渗透 压（糖浓度）越高 ，高糖浓度控制幼胚早熟 萌发的效果早已被证实。下述实例阐明不同 胚龄对糖浓度的要求。 ②提高无机盐浓度。 提高无机盐浓度也是为 了提高培养基渗透压。可加入适量的 NaCl 以提高渗透压，浓度一般为 0 ． 2 ％－ 0 ． 4 ％，超过 0 ． 8 ％对胚有毒害作用。 ③加人甘露醇提高渗透压。 甘露醇的浓度为 1 ． l ％－ 5 ． 5 ％，以部分地代替蔗糖，使幼 胚在等渗条件下继续胚性发育。 （二） 培养基酸碱度对胚性发育的影响 培养基酸碱度对胚性发育也是非常重 要的。通常胚培养所用 pH 值的范围为 5.2-6.3 。因植物种类不同而有所差异。 如： ? 荠菜： 5.4 － 7.5 桃： 5.8 ? 曼陀罗： 5.0 一 8.1 水稻： 5.0 ? 番茄： 6.50 大麦： 4.9 ( 三 ) 环境条件对胚性发育的影响 1 ）光照条件： 由于胚在胚珠内发育是不见光的。一 般认为在黑暗或弱光下培养幼胚比较适 宜。 光照对胚胎发育有轻微抑制作用， 离体培养条件下，幼胚正常胚性发育对 光的要求，还应根据植物种类来决定。 光照可以促进某些植物的胚转绿， 利于胚芽生长，而黑暗利于胚根生长。 因此以光暗交替培养较为有利。 ? 棉花：胚先在黑暗中培养，然后转 人光照下培养，子叶的叶绿素生成 很慢；而转人弱光下培养的幼胚， 子叶很容易产生叶绿素。 ? 芥菜：胚培养每天以 12 h 光照比全 暗条件好。 2 ）温度条件： 因植物种类而异，幼胚培养与其 他器官培养无多大区别。对于大多 数植物的胚来说，在 25 ～ 30 ℃为宜， 但是，早熟果树如桃的种胚，必须 经过一定的低温春化阶段才能正常 萌发生长，而马铃薯胚以 20 ℃为好。 7.3 胚乳培养 7.3.1 胚乳离体培养的意义 被子植物的胚乳是双受精的产物，是由精 细胞和二个极核融合而成，故胚乳细胞为 三套染色体 。但是由于胚囊类型不同，参 加融合的极核数目不同，胚乳的倍性亦不 同。如待宵草型胶囊只有一个极核与精细 胞融合，胚乳核为 2n ；贝母型胚囊两个极 核，其中一个是 n ，另一个是 3n ，与精细胞 融合后胚乳核为 5n ；椒草型胚囊中有 8 个极 核，与精细胞融合后胚乳核为 9n 。 胚 囊 至今， 尚未见到胚乳细胞在自然状态下器 官发生的报道。 最早报道由玉米胚乳离体培 养得到可连续生长的 愈伤组织 （ Lampe 等， 1933 ）。后来在巴婆 ( 番荔枝科 ) 、黄瓜（葫 芦科）、黑麦草（禾本科）、蓖麻（大戟 科）、桑寄生科、檀香科等植物相继报道由 胚乳培养得到愈伤组织。最先报道由胚乳组 织培养而 器官发生 的是柏形外果（檀香科） 的芽分化（ Johri 等， 1965 ）；通过离体胚 乳培养第 一个得到三倍体的植物 是罗氏核实 木（大戟科）（ Johri ， 1978 ）（表 7 － 2 ， 表 7 － 3 ）。 当前胚乳离体培养的研究进展： 1) 仅能形成愈伤组织的有：巴婆、黑麦草、 黄瓜、檀香、小麦、沙针、美洲懈寄生、 澳洲根寄生。 2 ）达到器官分化水平的有：玉米、蓖麻、 巴豆、麻疯树、变叶木、黑种草、葡萄荷 叶芹、桃、柏形外果、印度五蕊寄生、白 花寄生、酸细檀、怒江钝果寄生、楔叶钝 果寄生。 3 ）能形成完整植株的有：罗氏核实木、大 麦、水稻、苹果、抽、橙、马铃薯、桃、 荷叶芹。 目前为止，约有 30 种被子植物的胚 乳培养，达到不同程度的细胞分裂和 器官分化。说明 胚乳组织也具有发育 成植株的潜在能力 。在应用上胚乳培 养为植物界 创造新种 提供了一条可行 途径。 7.3.2 胚乳培养的方法 取有胚乳的果实或种子，进行表面 灭菌，然后在无菌条件下剥离胚乳 接种培养。培养时有带胚培养和不 带胚培养两种方式。 带胚培养胚乳组织容易成功，不 带胚培养胚乳组织成功率低。 取授粉 4 ～ 8 天后的幼果，常规消毒后， 在无菌条件下切开果实，取出种子，小心 分离出胚乳。接种在培养基上，可用 MS 、 White 等，加入 2 ， 4-D 或 NAA0.5 ～ 2.0mg/l ， BA0.1 ～ 1.0 mg/l 。在 25 ～ 27 ℃和黑暗条件 或散射光下培养 , 约 6 ～ 10 天胚乳开始膨