细胞培养的生命期.pdf

第一章 动物细胞工程概论 第 四节 培养细胞的生命期 从动物或人体组织分离细胞，在体外进行细胞培养，这些细胞能够在体外培 养基中持续增殖和生长。从动物组织分离的细胞在体外培养中持续增殖和生长的 时间就称为培养细胞的生命期。培养细胞的生命期与细胞的种类、形状和供体的 年龄等因素密切相关。例如，源于人胚胎的二倍体成纤维细胞，可以在体外连续 传 30-50 代，体外培养的肌腱细胞大约只能传代 13 代，软骨细胞仅能传代 6 代。 正常细胞体外培养的生命期可分为三个阶段，原代培养期、传代期和衰退期 （图1） 图 1 细胞体外培养的生命期 原代培养期：也称初代培养期，称初代培养期，是从机体中取出组织、分离 细胞、接种培养至第一次传代之前的这一时期。细胞经历了从体内环境，到体外 环境的过渡和适应，逐渐恢复细胞的增殖能力，可看到细胞的分裂增值。 原代细胞培养过程包括分离组织、解离组织块、接种到培养器皿中进行培养 的过程。根据组织的来源不同，可采用组织块法和分散细胞法 （图2）。例如心 肌细胞的原代培养可采用组织块法，就是把心肌组织用剪刀剪碎成大约 1mm3 的 组织块，让组织块贴于瓶壁上，加入培养基进行培养 （图3）。像肝脏、肾脏、 软质肿瘤等柔软的组织等，就可以用分散细胞法，把小的组织块中加入胰蛋白酶 消化，通过筛网过滤，分离出细胞悬液，加入细胞培养瓶中培养。培养瓶中的细 胞开始分裂，长出新的细胞，原代培养就成功了。 分 组 散 织 细 块 胞 法 法 块 法 图2 原代培养的组织块法和分散细胞法 原代培养的心肌细胞 图 3 原代培养的细胞 原代培养长出的细胞，成功的进行细胞传代，这种传代的细胞就叫细胞系。 原代培养长出的细胞往往都是多种细胞类型来源的细胞，是混合细胞，所以， 要通过细胞克隆化或通过药物筛选等方法，从原代培养物或细胞系中，获得生物 学性状单一的细胞，获得单细胞克隆形成的细胞群，这种细胞具有均一的遗传特 征，这种细胞就是细胞株。我们实验室常用的传代细胞大多都是细胞株。 第二，传代期，传代期是从原代培养中来的细胞系，进行细胞传代培养的过 程。传代期在细胞培养生命期中持续时间最长。细胞增殖旺盛，可多次反复传代， 直到细胞增殖速率变慢或不再增殖。 传代期的长短与细胞种类、供体年龄等因素有关。在细胞连续传代过程中， 群体中快速