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DPPH 实验步骤
一、原理：
DPPH是一种很稳定的氮中心的自由基，它的稳定性主要来自 3 个苯环的共振稳定作用
及空间障碍， 使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。 作为一
种稳定的自由基， DPPH可以捕获 (清除 ) 其他的自由基。因此通过加入 DPPH后观察某一化
学反应的速率是否减慢， 来作为这一反应是否具有自由基反应本质的指标。 由于 DPPH自由
基在以 520nm 为中心处具有强烈的吸收，因此在溶液中呈现深紫色，并且在被中和之后会
变为无色或浅黄色。
DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其醇溶液呈紫色，且需低温避光储藏，具有
单一电子，故能接受一个电子或氢离子，在波长为 517nm 下具有最大吸收。有自由基清除
剂存在时， DPPH 的单电子被捕捉而使其颜色变浅，在最大光吸收波长处的吸光值下降，且
下降程度呈线性关系， 吸光度水平的降低表明抗氧化性的增加， 从而以评价试验样品的抗氧
化能力。此抗氧化能力用抑制率来表示，抑制率越大，抗氧化性越强。
二、实验步骤：
1.配制 0.1mM 的 DPPH溶液： 配两次， 每次取 0.002gDPPH溶于 50mL 乙醇，避光 保存。
2.配制 0.5mg/mL 的 Vc 溶液，至少 2mL （设为阳性对照，选择性做）
3.配制一定浓度的样品溶液 ，至少 2mL 母液 （也可以配制不同溶度梯度样品， 计算 IC50）
4.上板（避光操作，上完板后，室温避光 30 分钟，测吸光度）
96 孔板，三组，每组设 3 个复孔，每孔加入量及 96 孔板分布如下：
sample （样品组）：样品溶液 100uL+ DPPH醇溶液 100uL (每个浓度 3 个孔 )
blank （空白组）：样品溶液 100uL+无水乙醇 100uL （每个浓度 3 个孔）
control （对照组）：DPPH醇溶液 100uL+水 100uL （一块板可共用一个对照组 ,3 个孔）
样品 VC
浓度 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6
sample
blank
control
5.检测并计算清除率
测 517nm 处的吸光度，取平均値，计算每个浓
度的 DPPH清除率，做出折线图。
清除率 = （1 - （Asample - Ablank ）/ A control ）X 100%
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