蛋白质的稳定性和稳定化选编.pptVIP

第四章 酶蛋白质的稳定性和稳定化 ? 在已研究过的几千种酶中，只有极少数可以 应用于工业生产，绝大多数酶都不能应用于 工业生产，这些酶虽然在自然状态下有活性， 但在工业生产中没有活性或活性很低。这是 因为工业生产中每一步的反应体系中常常会 有酸、碱或有机溶剂存在，反应温度较高， 在这种条件下，大多数酶会很快变性失活。 ? 提高蛋白质的稳定性是工业生产中一个非常 重要的课题。一般来说，提高蛋白质的稳定 性包括：延长酶的半衰期，提高酶的热稳定 性，延长药用蛋白的保存期，抵御由于重要 氨基酸氧化引起的活性丧失等。 ? 下面举一个如何通过蛋白质工程来提高重组β - 干 扰素专一活性和稳定性的例子。 – 干扰素是一种抗病毒、抗肿瘤的药物。将人的干扰素 的 cDNA 在大肠杆菌中进行表达，产生的干扰素的抗病 毒活性为 10 6 U/mg ，只相当于天然产品的十分之一， 虽然在大肠杆菌中合成的β - 干扰素量很多，但多数是 以无活性的二聚体形式存在。为什么会这样？如何改 变这种状况？ – 研究发现，β - 干扰素蛋白质中有 3 个半胱氨酸（第 17 位、 31 位和 141 位），推测可能是有一个或几个半胱氨 酸形成了不正确的二硫键。研究人员将第 17 位的半胱 氨酸，通过基因定点突变改变成丝氨酸，结果使大肠 杆菌中生产的β - 干扰素的抗病性活性提高到 10 8 U/mg ， 并且比天然β - 干扰素的贮存稳定性高很多。 提高酶蛋白质的稳定性 ? 葡萄糖异构酶（ GI ）在工业上应用广泛，为 提高其热稳定性，朱国萍等人在确定第 138 位 甘氨酸 (Gly138) 为目标氨基酸后，用双引物法 对 GI 基因进行体外定点诱变，以脯氨酸 （ Pro138 ）替代 Gly138 ，含突变体的重组质粒 在大肠杆菌中表达，结果突变型 GI 比野生型 的热半衰期长一倍；最适反应温度提高 10 ～ 12 ℃；酶比活相同。 ? 据分析， Pro 替代 Gly138 后，可能由于引入了 一个吡咯环，该侧链刚好能够填充于 Gly138 附近的空洞，使蛋白质空间结构更具刚性， 从而提高了酶的热稳定性。 第一节 蛋白质的稳定性 ? 蛋白质稳定性的分子原因 – 金属离子、底物、辅因子和其他低相 对分子质量配体的结合作用 – 蛋白质 - 蛋白质和蛋白质 - 脂的作用 – 盐桥和氢键 – 二硫键 – 对氧化修饰敏感的氨基酸含量较低 – 氨基酸残基的坚实装配 – 疏水相互作用 科学家发现能预测蛋白质稳定性 的小分子 ? 近日，德克萨斯州立大学医学院 (UTMB) 的 研究人员发现了一种新的方法，可预测一 种特殊小分子在处于极端环境的各种器官 中所具备的能力。 ? 研究结果发表在 10 月 7 日网络版的《美国国 家科学院院刊》（ PNAS ）中，该方法是通 过一种叫 渗透剂 的有机小分子对细胞内 蛋白质稳定性影响情况来进行研究的。结 果将有助于老年痴呆症、囊肿性纤维化、 肾脏疾病和稳定蛋白药物等的研究。 ? 渗透剂的作用第一次是在 1982 年被发现，其主 要作用是保护在逆境中的生物。它们能保护人 肾脏中的细胞，如分解掉大量含破坏蛋白质的 化学尿素；它们能使一种冻结的北极青蛙在无 损伤的情况下解冻；并且它们还能使奇异微小 生物 水熊 生活在极度干燥、强烈辐射和绝对 零度以上几度到过热蒸汽的温度范围内。 ? Matthew Auton 和 D. Wayne Bolen 在文章中描述 了热力学计算的应用，并成功预测了多种渗透 剂在逆境状态下保护蛋白质的能力。极热、极 冷或细胞周围化学环境的改变均能影响蛋白质 正常功能的行使，而渗透剂则可以让蛋白质具 有正确的结构形式，并正常行使功能。 ? 蛋白质是折叠的，生物医学研究的主要目的 就是了解它们折叠或在不稳定时展开的原因。 ? 需要研究渗透剂是如何影响不同蛋白质的稳 定性的，以及它们之间的互作情况，这将为 研究蛋白质折叠过程提供重要的信息。 ? 蛋白质的折叠与伸展是病变的一个明显特征， 如老年痴呆症、疯牛病和囊肿性纤维化。渗 透剂在人体多种器官行使功能，尤其是在肾 脏和大脑中。没有渗透剂，肾脏将无法行使 功能，大脑组织也不能反应。 ? 医学研究主要针对它们在肾脏中的作用，而 它们也出现在其它很多组织中，该项技术将 有助于医学研究人员研究渗透剂在整个体内 的作用。 第二节 蛋白质不可逆失活的原因和机理 ? 蛋白水解酶和自溶作用 ? 聚合作用 ? 极端 pH ? 氧化作用 ? 表面活性剂和去污剂 ? 变性剂 ? 重金属离子和巯基试剂 ? 热 ? 机械力