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薜荔中的总黄酮含量测定研究 薜荔是桑科榕属植物，主产我国，分布广，野生资源极为丰富，其生长不择土壤、气候，耐干旱，极易人工种植，是一种很有开发潜力的安全、健康性新型天然植物资源。 薜荔含有丰富的黄酮类物质，广泛分布在种子、花被、茎，叶等部位。黄酮类化合物是一类生理活性较强的化合物，具有抗动脉硬化、抗菌、抗炎、降胆固醇、解痉等作用。薜荔中总黄酮的提取研究对薜荔的开发具有非常重要的意义。吴文珊[1]等曾用传统的回流提取法对薜荔叶及花序托中的总黄酮含量进行了测定，并对影响因素进行了探讨，取得了较好的实验结果，但是存在耗时长和步骤繁琐等缺点。 超声波提取是利用超声波具有的机械效应、空化效应和热效应，通过增大介质分子的运动速度、增大介质的穿透力以提取生物有效成分。它具有缩短提取时间、提高活性成分提取率、节约能源、避免高温对成分的影响等优点[2]。本实验在前人工作的基础上，选取了超声提取和回流提取两种不同的提取技术对薜荔籽和薜荔叶中的总黄酮含量进行了测定。结果表明薜荔叶中总黄酮含量比薜荔籽中的高，且超声提取法比回流提取法取得了更好的实验结果。 1实验部分 1.1材料与试剂 材料：薜荔果采集于湖南省永州市祁阳县肖家村镇八庙村，薜荔叶采集于湖南生物机电职业技术学院藤本研究基地。 试剂：芦丁标准品（上海源叶生物科技有限公司），亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等其它所有试剂均为分析纯，所用水为蒸馏水。标准储备液及由其稀释而成的标准溶液均置于4℃冰箱中保存。 1.2仪器 752型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司），HH-600数显三用恒温水浴箱（无锡沃信仪器有限公司），KQ-100E型超声波（昆山市超声仪器有限公司），回流装置（北玻实验室玻璃仪器），FW177型中草药粉碎机（ 上海隆拓仪器设备有限公司），SHA-D(Ш)循环式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司），RE-52C型旋转蒸发仪（巩义市予华仪器有限责任公司）。 1.3实验方法 回流提取法和超声提取法均根据文献采用合适的提取方案进行实验，具体条件为：料液比均为1:40，提取溶剂均为60%的乙醇，提取温度均为75℃。 超声条件为：超声频率40kHz，功率80W。 1.3.1回流提取法提取薜荔中的总黄酮 1.3.1.1薜荔叶的提取 将新鲜采取的薜荔叶于70℃烘箱中干燥，粉碎，过40目筛。称取干粉3.0000g，加入60%的乙醇水溶液定容至120ml，浸提1h，在75℃水浴回流4h。趁热过滤，滤液冷却至室温，减压回收乙醇，用60％乙醇定容至100mL。 1.3.1.2薜荔籽的提取 将新鲜摘取的薜荔果切成小块，将果壳和薜荔籽分离，薜荔籽置于70℃烘箱中烘干，粉碎，过40目筛。称取干粉3.0000g，加入60%的乙醇水溶液定容至120ml，浸提1h，在75℃水浴回流4h。趁热过滤，滤液冷却至室温，减压回收乙醇，用60％乙醇定容至100mL。 1.3.2超声提取法提取薜荔中的总黄酮 1.3.2.1薜荔叶的提取 将新鲜采取的薜荔叶于70℃烘箱中干燥，粉碎，过40目筛。称取干粉2.5000g，加入60%的乙醇水溶液定容至100ml，浸提1h，在75℃超声2h。趁热过滤，滤液冷却至室温用60％乙醇定容至100mL。 1.3.2.2薜荔籽的提取 将新鲜摘取的薜荔果切成小块，将果壳和薜荔籽分离，薜荔籽置于70℃烘箱中烘干，粉碎，过40目筛。称取干粉2.5000g，加入60%的乙醇水溶液定容至100ml，浸提1h，在75℃超声2h。趁热过滤，滤液冷却至室温用60％乙醇定容至100mL。 1.3.3标准曲线的绘制 1.3.3.1对照液的配制 ①标准储备液：准确称取芦丁10mg，用无水乙醇溶解，定容至10ml（浓度为1mg/ml），置于4℃冰箱中保存。 ②标准溶液：准确移取2.5ml芦丁标准储备液，用60%的乙醇稀释成25ml(浓度为100ug/ml)，置于4℃冰箱中保存。 1.3.3.2标准曲线的绘制 准备25毫升容量瓶6个，按下表依次加入试剂，注意每加入一种试剂时需要充分摇匀，放置6min。然后在室温下放置l0～15min，于510nm波长处测定吸收度A。 表1标准系列溶液的配制 标准系列溶液的配制 1 2 3 4 5 6 芦丁对照（ml) 0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 5%亚硝酸钠（ml) 0.75 0.75 0.75 0.75 0.75 0.75 10%硝酸铝（ml) 0.75 0.75 0.75 0.75 0.75 0.75 1%氢氧化钠（ml) 10 10 10 10 10 10 60%乙醇定容（ml) 25 25 25 25 25 25 芦丁含量（mg） 0.0000 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.3.4样品液的测定 准确吸取2.50mL样液三份于3个