龙牙百合的快繁技术方案设计毕业设计.docVIP

龙牙百合的快繁技术方案设计 龙牙百合为百合科百合属多年生草本植物 ，因其鳞茎肥大 、形似龙牙而得名，是百合中最为名贵的一种 。龙牙百合含多种氨基酸、蛋白质、淀粉、磷脂、百合苷 A、B等抗癌性植物碱及维生素 B1、B2等营养物质，且具养阴润肺、清心安神l 之药效，其干片一直深受港商和东南亚市场的欢迎，是目前进行农业结构调整、提高农民收入的主选作物之一。但由于长期的无性繁殖使病毒在龙牙百合植株体内积累而引发病毒病严重地影响龙牙百合鳞茎的产量和品质，极大地阻碍了龙牙百合的大面积推广。侵染百合的病毒种类很多 ，现已知百合病毒病原有 l4种 ，类菌原体 1种。其中，危害严重的病毒主要有4种，即百合无症病毒、黄瓜花叶病毒一百合株系、郁金香碎锦病和百合丛簇病毒。其他种类均为局部地区发生，对百合不构成普遍危害。据报道，百合鳞茎中，LSV的带毒率为 100％，LSV+CMV的带毒率为42％～54％ 。在无良好防护的田块，经过3 ~4年的栽培，大部分百合都会感染 2~3种病毒。到目前为止，世界上尚无有效的药剂治疗植物病毒，利用组织培养进行脱毒快繁可能是解决这一问题的有效途径。 1、材料、器材及试剂 1.1材料　龙牙百合鳞茎（湖南隆回产） 1.2器材　无菌超净台、高压蒸汽灭菌锅、电炉、电子天平、接种器具、器械消毒器、脱脂棉 1.3试剂　70%医用酒精、0.1%升汞、MS培养基母液、PH调节剂、PH试纸等 2、步骤方法 2.1外植体的准备 2.1.1外植体的选择 龙牙百合的鳞片、顶芽、茎段、叶片、根尖、花梗、花瓣、花托、花丝、花药、胚、子房等都可作为组织培养的外植体。卢其能采用龙牙百合的鳞片、顶芽、茎段和叶片进行比较研究，认为以鳞片切块组培的分化率最高。一般而言，以鳞片作为外植体进行龙牙百合快速繁殖较好。 2.2.2外植体的灭菌 龙牙百合外植体的灭菌一般采用酒精、升汞和漂白粉等。先将外植体视洁净状况用流线形自来水冲洗15 min至24 h不等 ，再用70％或75％酒精预灭菌15 30 S，然后用0．1％升汞灭菌10 min左右。在龙牙百合顶芽和叶片灭菌时，采用10％漂白粉溶液消毒10 min即可 。材料灭菌后，均要用无菌水反复冲洗5次左右。 2.2培养基的配制与灭菌 　　根据设计配方，确定培养基配制体积并计算配方中各成分称取量与称取量。取烧杯或三角瓶注入一定量的蒸馏水，将各种母液按所需容积分别用移液管吸取并混合在一起，然后按要求加入一定量的激素、蔗糖后定容至一定体积。用1mol/L的NaOH或HCl调节pH； 如制固体培养基，则加入1%左右的琼脂后加热煮沸，使其熔化；分装，可用漏斗将液状培养基注入培养瓶，注入量视培养瓶容量大小而定，通常为容器的1/5左右；封瓶口；高压蒸汽灭菌：120℃，1.5Mpa,消毒15～20min；注意压力不能太大，时间也不宜过长，否则蔗糖、有机物特别是维生素类物质会在高温下分解，影响培养基的酸碱度，琼脂也会分解，颜色变深且不易凝固。灭菌后的培养基可放入接种室内静置，让其降温后凝固，如需斜面可将其斜放。 2.3接种培养 将外植体经消毒灭菌后，在无菌条件下放入培养容器内培养基上进行培养。控制温度与光照强度，培养一段时间，长出初代诱导物，再进行继代与生根培养。 3、预期研究成果 通过龙牙百合的快繁技术设计方案，经过三个阶段的培养基筛选，预期获得龙牙百合快繁培养技术最佳流程，同时诱导出试管苗。