化学发光法使用说明.pdf

Western blotting ECL 化学发光法使用说明 货号 ： SW2010Western blotting ( 小鼠 IgG) ECL 化学发光法显色试剂盒 SW2020Western blotting ( 兔 IgG) ECL 化学发光法显色试剂盒 SW2030Western blotting ( 山羊 IgG) ECL 化学发光法显色试剂盒 SW2040Western blotting( 小鼠/ 兔 IgG) ECL 化学发光法显色试剂盒 SW2050Western blotting( 人 IgG) ECL 化学发光法显色试剂盒 产品内容： 1. 封闭试剂： 30g( 可配制 400ml) 。 2. 10 倍浓缩抗体稀释液， 50ml。 3. HRP 标记二抗， 0.3ml ，效价 1：500-1000 。 4. ECL 显色液， 25mlA+25mlB。 保存 ： -20 ℃避光密闭保存，一年有效。若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和 ECL 显色 液存放于 2-8 ℃以方便使用。 产品简介 ： SDS电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄 膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与 对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。 经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带（抗原所在位置） 。 操作步骤 ：( 仅供参考) 常规电泳转膜后: 1) 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用 TBS-T 漂 洗 3 次每次 5min, 以尽量洗去转印膜上的 SDS，防止影响后面的抗体结合。 2) 按 5g 封闭试剂加 100ml 双蒸水计，配制膜封闭液， 配好的膜封闭液为乳白色悬液， 将漂洗过的转印膜放入封闭液内， 置摇床孵育， 室温封闭 30min。用 TBS-T 缓冲液 （PH7.6） 洗膜，室温漂洗 3 次每次 5min。 3) 将 10×抗体稀释液用双蒸水稀释成 1× （10ml 10×抗体稀释液加入 90ml 双蒸水， 混匀， 可 4℃保存三个月） 。 此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。 4) 用 1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将 杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口， 4℃孵育过夜或 37℃摇动孵育 2h。此用过 的抗体一般可回收第二天再使用一次。 注：如果所加一抗不同， 可在此步将膜沿电泳方向剪 成条，分别作好标记，分开孵育。 5) 用 TBS-T 缓冲液（ PH7.6）洗膜，室温漂洗 3 次每次 5min。 6) 用 1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按 10ml 抗体稀释液加入 15ul HRP 标 记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口， 37℃ 摇动孵育 1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。 7) 用 TBS-T 缓冲液（ PH7.6）洗膜，室温漂洗 3 次每次 10min。 8) 根据用量，取 ECL 发光