生物制药工艺 胰岛素的提取制药 胰岛素的提取制药.pptxVIP

生物制药工艺课程胰岛素的提取制药胰岛素提取制药工艺胰脏冷冻胰脏刨碎成片提取碱化、酸化减压浓缩去脂、盐析精制 一、胰脏冷冻 胰脏在冻结状况下粉碎,有利于细胞膜的破裂使之提取完全,并可避免蛋白水解酶对胰岛素的破坏.二、胰脏刨碎成片 刨碎成片有利于与酸醇提取剂充分接触, 增大提取率.三、提取 1）PH为2.5～3.0（胰岛素在酸性条件下稳定）2）乙醇含量为70%左右。（在此浓度下，胰岛素溶解度比较大，过高会使胰岛素变性）3）温度为13～15℃（低温，保持胰岛素活性）四、碱化、酸化 提取液在不断搅拌下加入浓氨水调pH值到8.0～8.4(温度10～15℃)立即进行过滤，除去碱性杂蛋白质，滤液应澄清，并及时用硫酸酸化至pH值3.6～3.8。降温至5℃静置4小时以上，使酸性杂蛋白充分沉淀。[操作注意事项]：去除杂碱性蛋白后应立即调溶液的pH值至酸性（在碱性条件下，胰岛素会散失活性，综合考虑去除杂蛋白的因素，故应立即调至酸性）五、减压浓缩 吸上层清液至真空蒸发器内，下层用帆布过滤，沉淀物弃去，滤液并入上清液。清液在30℃以下减压蒸去乙醇，浓缩至浓缩液比重为1.04～1.06（约为原来体积的1/9～1/10）为止。 在这步操作中，主要是用来缩小溶液的体积，浓缩至一定的浓度，以便于下步的盐析操作。六、去脂、盐析 浓缩液转入去脂锅，5分钟内加热至50℃，立即用冰盐水降温至5℃，静置3-4小时，分离出下层清液（脂层可回收胰岛素）。调pH值到2.3～2.5 ，于20～25℃在搅拌下加入27%(W/V)固体氯化钠，保温静置数小时，析出之物即为胰岛素粗品。 脂肪加热溶解，密度小，浮在上层液，迅速冷却将其去除。七、精制1）第一次结晶 获得较纯的胰岛素，等电点结晶法，离心分离。2）第二次结晶 结晶,离心,同上3）干燥 生物大分子制备得到所需的产品后，为了防止变质易于保存和运输，常需要干燥处理，最常用的方法是真空干燥和冷冻干燥，某些无活性核酸、微生物酶制剂和酪蛋白等工业产品则较多地应用喷雾干燥、气流干燥等直接干燥法。 干燥可获得普通胰岛素，含有2%～5%的杂质，包括胰岛素原、胰岛素二聚体、胰多肽等，层析时有A、B、C三个峰，C峰才是胰岛素。4）柱层析 将结晶胰岛素经过凝胶过滤层析，胰岛素纯度达97%以上，此时在色谱图上仅占一个峰，故称单峰纯胰岛素。 经过凝胶过滤层析可获得单峰纯胰岛素，若将单峰胰岛素再用离子交换层析法进一步纯化，去除胰岛素原等杂质，使其纯度提高到99%以上。目前国内不能生产，尚依赖进口。其特点是：纯度高，副作用极少，生物效价高。5）锌沉淀 在收集液中加入4mol氨水调pH值至6.2～6.4,加入3.6%（V/V）的醋酸锌溶液（此溶液浓为20%），再用4mol氨水调pH值6.0，低温放置过液，离心得到沉淀。 6）第三次结晶第三次等电点结晶，离心收集纯度高的胰岛素锌盐。7）干燥 获得白色粉状胰岛素8）制剂 胰岛素口服能受胃肠消化酶分解而失效，因而必须制成注射液：有胰岛素注射液、蛋白锌胰岛素注射液、精蛋白锌胰岛素注射液等。主要工艺设备板框压滤机、酸化罐、碱化罐、盐析罐、真空浓缩罐、离心机、真空干燥箱等感谢聆听Thanks for listening