小鼠单抗腹水纯化步骤.docxVIP

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  • 2021-02-24 发布于天津
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PAGE PAGE #/ 7 小鼠单抗腹水纯化 一、XX 辛酸一硫酸铵法 【原理】 在酸性条件下( pH= 4.5),非IgG的蛋白成分(包括白蛋白,部分lg),能被辛酸等短链脂肪 酸沉淀,上清中剩余的蛋白主要为IgG,再用硫酸铵沉淀上清,即可获得纯度较 高的IgG。辛酸一硫酸铵法比硫酸铵法能或得更高纯度的IgG。 【溶液配制】 1、 60mM 的醋酸缓冲液( pH 4.0)200ml取0.2M醋酸缓冲液母液 60ml,力口 ddH 20 至 200ml,调 pH 为 4.04. 10.2mM 乙酸 49.2ml,折合566卩的冰乙酸。 0.2M醋酸缓冲液母液60ml: O 20.2M 乙酸钠 10.8ml( 0.2M 乙酸钠: 2.72g三水合乙酸钠(MW 136.08) O 溶解于 100mlddH 20XX) 2、10*PBS( 0.1M,pH 7.4)500ml 取 0.2M PB母液 250ml 加水定容到 500ml,加入 45gNaCI (使 NaCI终浓度为9%),此时pH约为 7.35,调 pH 至 7.4. 0.2M PB母液 250ml: 0.2M Na 2HPO 4202.5ml (折合 14.5gNa 2HPO 4 12H 2O) 0.2M NaH 2PO 447.5ml (折合 1.482gNaH 2PO 4 2H 2O) 3、 1M Tris

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