腺病毒包装注意事项.doc.docxVIP

在 293 细胞中大量扩增腺病毒 一旦重组病毒已被纯化和鉴定，即可在 293 细胞中进行大量扩增。本手册提供了递增培养规模和腺 病毒感染周期的基本方法， 按这一方法最终得到的病毒量约为  3×1011 ～3× 1012 。由于一个细胞中 所含的病毒颗粒为  1000 ～ 10000  ，因此  1L  培养细胞可得到约  5×1012  病毒颗粒。如果要把病毒用 氯化铯梯度离心纯化，则必须至少 3 ×108 的细胞，这样才能正确分辨出病毒带。对于蛋白表达，则 根据需要可在任何一步扩增步骤中停止，离心沉淀细胞后按照适当的操作方法进行蛋白抽提 (根据蛋 白类型的不同抽提上清或细胞沉淀 )。为优化时间进程，每个感染周期必须与下一次细胞扩增培养同 步。如果由于各种原因不能同步，则必须将病毒冻存，直至下一次细胞培养开始后再融化病毒。注意每次扩增都将会剩下一些病毒，这些病毒先不必丢弃，以便下一步扩增失败时备用。每次扩增最好都用最低代的病毒颗粒，这样产生突变型病毒的可能性会大大降低。 操作步骤： 1 在 100mm 培养皿或 75cm2 培养瓶中加入 10ml DMEM5% 培养 5× 106293 细胞。 2 取 0.5ul 首次扩增的病毒保存液， 加入 DMEM5% 至 1ml ，混匀，这样稀释得到的 MOI 值约为 5。 3 移去培养液，小心加入病毒混合液，切勿破坏细胞单