生物化学资料：DNA replication.pptVIP

1958年Meselson和Stahl利用氮标记技术在大肠杆菌中首次证实了DNA的半保留复制，他们将大肠杆菌放在含有15N标记的NH4Cl培养基中繁殖了15代，使所有的大肠杆菌DNA被15N所标记，可以得到15N桪NA。然后将细菌转移到含有14N标记的NH4Cl培养基中进行培养，在培养不同代数时，收集细菌，裂介细胞，用氯化铯(CsCl)密度梯度离心法观察DNA所处的位置。由于15N桪NA的密度比普通DNA(14N－DNA)的密度大，在氯化铯密度梯度离心(densitygradientcentrifugation)时，两种密度不同。 * 1、互补DNA双链的分解 为了进行母链双链的复制，双链必须首先在一小的区域开始分解，因为聚合酶只能使用单链DNA作为模板。原核生物体中，DNA复制开始于一个单一独特核苷酸序列，称为复制原序列。真核生物中则富含多个复制原序列有助于长的DNA分子快速复制。 复制起点或复制原点（英语：origin of replication 或 replication origin）是在基因组上复制（replication）起始的一段序列。[1]其中复制可以是在生命体中（如真核生物或者原核生物）的DNA复制，或者是在RNA病毒（如双螺旋RNA病毒）里面的RNA复制。DNA复制可能是单向或者双向的进行。 * 2、在底物的支持下进行半保留复制 此时分开的DNA单链作为模板，底物A、T、C、G遵循碱基互补配对原则在DNA聚合酶的作用下逐一加在母链相应地方合成新链。合成的DNA一条链为母链，一条为新合成链，故称半保留复制。 * * DNA is synthesised from 5 to 3, thus when copying the 3 to 5 strand, replication is continuous. Phosphodiester links form between the 3 to 5 and nucleotides can be added with the aid of the enzyme DNA polymerase for the continuous leading strand. However, in order to synthesise the lagging strand (the replication fork which is travelling in the opposite direction) synthesis occurs in small sections (100-200 nucleotides at a time in eukaryotes). These new stretches of DNA are called Okazaki fragments and each one requires its own RNA primer. Okazaki Fragments： In bacteria they are approximately 1000 nt in length; in eukaryotes they are approximately 200 nt in length * Okazaki fragments are between 1000 and 2000 nucleotides long in Escherichia coli and are approximately 150 nucleotides long in eukaryotes * （一）复制叉由5’向3’方向连续复制，称为前导链；另一条链复制叉由3’向5’移动，而DNA复制方向不变，形成许多不连续片段，称为冈崎片段，最后连接成完整的DNA，称为滞后链。 （二）首先由引物合成酶由5’向3’方向合成10个核苷酸以内的RNA引物，然后聚合酶III在引物3’-羟基上合成DNA，再由聚合酶I切除引物，填补空白，最后DNA连接酶将冈崎片段连接起来，形成完整DNA。 （三）复制具有高度忠实性，其错配几率约为10-10，从热力学上考虑，碱基发生错配的几率约为10-2，酶对底物的选择作用和校正作用各使错配几率下降10-2，所以体外合成DNA的错配几率为10-6。体内复制叉的复杂结构提高了复制的准确性，修复系统对错配加以纠正，进一步提高了复制的忠实性。 * 根据对病毒、原核生物甚至真核生物DNA复制机制的研究，在生物界存在如下两种复制方向：①?从起始点向一个方向进行，通常称为单向复制；②?从起始点向两个方向进行，称为双向复制。 通常情况下，复制是对称的，即两条单链同时进行复制；但也存在不对称复制，即一条链复制后再进行另一条链的复制。 大多数生物染色体DNA及病毒环形DNA等的复制是