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动物细胞工程课堂笔记 动物细胞工程常用的技术 ? 动物细胞培养：是其他动物细胞工程技术的基础。 ? 动物细胞融合 ? 动物细胞核移植 ? 生产单克隆抗体等 ? 一 .动物细胞培养 （一）概念 二）、原理： ? 如何进行细胞培养 ? （三）相关概念 细胞贴壁：培养贴附性细胞时 ,细胞要能贴附于底物上才能生长繁殖 . 细胞接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层， 此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 般培养的第 1 代细胞与传 般培养的第 1 代细胞与传 10 代以内 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养 瓶中继续培养，称为传代培养。 细胞株： 原代细胞一般传至 10 代左右细胞生长停滞， 大部分细胞衰老死亡， 少数细胞存活到 40~50 代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至 50 代后又出现细胞生长停滞状态， 只有部分细胞由于遗传物质的改变， 使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易 传代培养。 思考题： 1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？ 4、细胞膜的主要成份是什么？ 5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？ 6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？ 7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ （四）、动物细胞培养的条件 1、无菌、无毒的环境 添加一定量的抗生素，定期更换培养液 2、营养 添加：糖（葡萄糖） 、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清等。 3、温度和 PH 培养室中控制 ,使之达到 36.5 ± 0.5 C , 7.2~7.4 4、气体环境： 培养箱中提供 O2 和 CO2 （95%空气和 5% CO2 ） （五）、动物细胞培养技术的应用 （ 1） 培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植 （ 2） 基因工程的受体细胞 （ 3 ）细胞的生理、药理、病理研究 植物组织培养和动物细胞培养的比较：见三维设计 P44旁栏 进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋 白酶行吗？ 用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜 pH约为2，当 pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境 pH为7.2?8.4。多数动物细 胞培养的适宜 pH为7.2?7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，而胰蛋白酶在此环境中活性较 高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。 胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 提示：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有 损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 二、动物细胞核移植 （一）概念： 克隆动物：用核移植的方法得到的动物。 （二）、分类： 胚胎细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易 体细胞核移植：细胞分化程度高，恢复全能性困难 克隆动物：用核移植方法得到的动物. 克隆（clone）是指通过无性生殖而产生的遗传上均一的生物群，即具有完全相同的遗传组 成的一群细胞或者生物的个体。克隆在希腊语中是 小树枝叶”的意思，用以指无性增殖物。 （三）、体细胞核移植的过程： 思考： 核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？用此细胞作为受体细胞有什么好处？ 通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎? 过程： 供体休细胞一细胞培养一休细胞 注人卵巢卵母细胞豔去核一无核卵母细胞黔细胞一胚胎 注人 卵巢卵母细胞豔去核一无核卵母细胞 黔细胞一胚胎 P49讨论: 在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核? 用于核移植的供体细胞一般都选用传代 10 代以内的细胞，想一想，这是为什么？ 答：培养的动物细胞一般当传代至 10?50代左右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞 遗传物质可能会发生突变，而 10 代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细 胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传代 10代以内的细胞。 你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了 100% 的复制 吗？为什么？ 绝大部分 DNA 来自于供体细胞核，但其核外还有少量的 DNA ，即线粒体中的 DNA 是来自于 受体卵母细胞。此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些行为、习性的形成与所处 环境有很大关系，核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同，其形成的行 为、习性也