【国自然】境和遗传因素导致男性不育与出生缺陷的分子机制.docxVIP

项目名称： 环境和遗传要素导致男性不育与出世缺点的分子机制 首席科学家： 孙斐 我国科学技能大学 起止年限： 2009.1至2013.8 依托部分： 我国科学院 一、研讨内容 拟处理的要害科学问题 精子反常是男性不育和父源性出世缺点发生的首要原因。说明环境EDCs、遗传因子改动致精子反常的分子机制和机体对EDCs易理性差异的分子根底，提醒男性不育和出世缺点的杂乱病因及其发病机制是本项研讨的要害科学问题。其间包含： 代表性EDCs经过何种分子机制影响下丘脑-垂体-睾丸轴以及精子发生、老练进程的不同环节，然后引起精子反常的各类表型？ 遗传因子如染色体重组交流和联会改动引起精子发生阻滞或染色体反常的分子机制和调控机理是什么？ 环境-基因交互效果导致男性不育的效果形式和机制是什么？ 精子反常导致常见出世缺点如染色体病和先天分心脏病发生的机制是什么？ 首要研讨内容 1．环境要素导致精子反常的分子机制 1.1代表性EDCs的代谢特征及其与精子反常的联络 经过体内和体外研讨代表性EDCs的代谢特征，说明EDCs内露出与精子反常的相关，寻觅触摸性生物标志物。从我国现在环境污染的现状动身，并结合项目组多年的研讨根底，遵从“有所为、有所不为”的准则，拟挑选邻苯二甲酸酯类、烷基酚类/双酚系化合物、农药杀虫剂类、多环芳烃类、多溴联苯醚类、全氟代烃类和重金属类共七类为方针EDCs。首要经过体外代谢特征和内排泄搅扰活性剖析并结合动物染毒模型，开始挑选出要害的EDCs因子；然后环绕这些要害EDCs，搜集男性不育（精子反常）和工作露出人群和正常男性对照病例，搜集流行病学信息和精液、血液、尿液生物样本，剖析EDCs内露出水平缓男性生殖内排泄功用，点评EDCs及其代谢与男性不育（精子反常）的相关性。 运用动物染毒模型结合基因芯片技能挑选与EDCs有关的代谢酶基因，使用酶反响学、细胞生物学和质谱剖析技能，判定代表性EDCs的要害代谢酶、代谢特征，开始承认候选代谢产品。使用受体报告基因体系，辨别候选代谢产品的雌激素/抗雌激素、雄激素/抗雄激素、甲状腺激素/抗甲状腺激素活性，开始清晰代表性EDCs代谢产品的内排泄搅扰活性。运用动物模型研讨代表性EDCs候选代谢产品与精子反常的联络，开始承认相关EDCs特征性代谢产品；使用高效液相 色谱等办法，剖析病例和对照人群生物样本中EDCs的代谢产品水平及与男性精子反常的相关性，挑选出代表性EDCs的触摸性生物标志物。运用代谢组学的研讨思路，使用UPLC-Q-TOF等办法针对精子反常不同表型和对照的生物样本进行代谢产品谱剖析，结合主成分剖析等数据剖析渠道进行剖析，进一步验证和承认上述生物标志物。 1.2 代表性EDCs致精子发生反常的分子靶标 经过体系研讨代表性EDCs对下丘脑-垂体-睾丸轴以及精子发生、老练进程不同环节的影响，开始说明代表性EDCs对雄性生殖危害的靶点和分子途径。 选用针对不同发育阶段小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴定点染毒的办法，查询染毒位点下流靶细胞的改动，剖析相应激素的排泄和相关基因的表达，承认EDCs危害下丘脑-垂体-睾丸轴的效果位点。要点注重代表性EDCs经过下丘脑-垂体-睾丸轴影响精子发生的微环境激素调控效果及办法，特别是支撑细胞、间质细胞对精子细胞的影响及它们的彼此效果。运用基因组学、蛋白组学、miRNA基因芯片技能构建正常小鼠和染毒小鼠精子发生不同阶段睾丸基因、蛋白质和miRNA表达谱，经过比对取得差异表达基因、蛋白质和miRNA，作为EDCs导致精子发生妨碍的侯选效果靶分子，对部分差异基因、蛋白质和miRNA进行功用研讨，说明EDCs的效果机制。隔阂，选用生物信息学技能对所取得差异表达基因及其编码蛋白进行整合剖析，发现EDCs导致精子发生妨碍的新的效果通路，企图找到要害性的分子符号物。然后，运用RNA搅扰和基因敲除技能，树立标志性分子的缺点小鼠动物模型和细胞模型，验证上述标志性分子对精子发生的影响。 2．遗传要素导致精子反常的调控机理 2.1 减数分裂重组交流反常致精子发生反常的分子机制 MLH1是重组交流进程中的要害蛋白，研讨MLH1在精子发生中的切当效果和分子机制，以说明重组交流反常导致不育和非整倍体构成的分子机理，为不育的个性化确诊供给新的依据。 别离获取人类正常、无精、有染色体别离过错的严峻寡精症患者的睾丸活检安排，运用免疫荧光细胞遗传学等办法对MLH1的数目、方位及调控(如位点干与)、重组交流相关的重要事情(如同源染色体配对、联会)和减数分裂阻滞、染色体别离过错之间的联络进行相关度的研讨。并隔阂讨论影响MLH1散布的要素如年纪、甲基化、miRNA、染色体端粒(长度和端粒酶活性)等。运用免疫荧光细胞遗传学研讨已知的重组交流相关蛋白(如RAD51/DMC1等)的时空表达形式和与MLH1共定位状