【国自然】99mtc标记促凋亡蛋白smac多肽进行肿瘤显像的基础研究.docxVIP

摘要：肿瘤的产生是细胞增殖与细胞凋亡失衡所造成的,凋亡按捺蛋白（IAP）是一类内源性caspases宗族按捺因子,其过度表达引起的凋亡缺乏与肿瘤产生,医治耐药密切相关。线粒体促凋亡蛋白Smac可经过其N端的4个氨基酸与多种IAP特异性结合，免除IAP的按捺效果。因而根据肿瘤高表达IAP, Smac多肽可特异性结合IAP这一特性，凭借NHS-MAG3双功用螯合剂，99mTc符号交融细胞穿透序列的Smac 6肽，进行肿瘤显像，量化IAP表达，比较肿瘤医治前后肿瘤吸取显像剂的差异，点评肿瘤医医治效。该办法的树立，不只可丰厚核医学肿瘤显像办法，还可将此多肽用医治性核素如188Re符号，以凋亡按捺蛋白为靶点进行肿瘤核素内放射医治，具有极大的研讨远景 关键词：凋亡按捺蛋白；促凋亡蛋白Smac；多肽符号；肿瘤核素显像 陈述正文 一 立项根据与研讨内容 ㈠立项根据 细胞凋亡是受基因调控的细胞自主逝世的进程，是一系列凋亡相关分子及其正、负调理分子相互效果的成果，这一进程对消除机体内老化细胞及具有潜在反常成长的细胞,坚持机体处于稳态起着重要的效果。凋亡中, caspases宗族即半胱天冬酶宗族具有重要位置。caspases按其在凋亡进程中的功用分为发动酶和效应酶。发动酶包含caspase2,8,9,10；效应酶包含caspase3, 6,7。效应酶经过堵截细胞间的信号传递,重组细胞骨架,封闭DNA 仿制和修正,损坏DNA和细胞核结构,诱导凋亡小体构成来履行凋亡功用[1]。 　 caspases宗族以无活性的前体方式存在,该前体需经级联性的蛋白水解效果而被激活。而凋亡按捺蛋白( inhibitor of apoptosis proteins, IAPs)是caspases宗族的内源性按捺因子，其成员包含XIAP,c-IAP1,c-IAP2,Survivin,Livin,NAIP,Apollen/Bruce,ILP2。该宗族成员均含有1～3个杆状病毒IAP重复序列( baculoviral inhibitor of apoptosis repeats,BIR)，运用此结构区与caspase3,7, 9结合而发挥凋亡按捺效果。比方XIAP含有3个BIR结构区，其间BIR1,2 连接区按捺caspase3,7，BIR3特异性地按捺caspase9。Livin含有一个BIR区，可特异性按捺caspase9;Survivin也经过其BIR区直接按捺caspase3,7[2,3]。 相同，IAPs抗凋亡的才能也遭到调理。线粒体促凋亡蛋白Smac( second mitochondrial activator of caspase) /DIABLO(direct IAP binding protein with low pI) 可与多种IAPs包含XIAP,c-IAP1,c-IAP2, survivin,livin的BIR区特异性结合，免除IAP的按捺效果,开释活化的caspases。Smac，25kDa巨细，前体存在于正常细胞线粒体,在凋亡信号影响下, 其N端55个氨基酸被剪切，构成老练的Smac开释到细胞质而发挥效果[4]。X线晶体衍射成像显现老练的Smac经过N端前4个氨基酸：丙氨酸－缬氨酸－脯氨酸－异亮氨酸（AVPI）与IAP宗族的BIR结构域外表凹槽结合，然后免除对caspase的按捺，发挥促凋亡效果[5]。（图1：caspases，IAP和Smac相互效果联系示意图，图2：Smac免除IAP按捺caspase效果示意图） 运用此特性， Arnt等别离将老练Smac 氨基端的4个氨基酸（AVPI）、6个氨基酸(AVPIAQ)、8个氨基酸(AVPIAQKS)与果蝇触角转录因子穿透序列（RQIKIWFQNRRMKWKK）相连接，组成可穿透细胞的交融多肽，与一些上皮来历的肿瘤细胞如乳腺癌细胞株MCF-7,T47D孵育，经过免疫共沉积的办法证明各种交融多肽确实能穿透细胞膜，与内源性的XIAP,cIAP1结合，并能进步化疗药物如依托泊苷、紫杉醇诱发的凋亡，其间Smac 6肽才能最强[6]。Vucic等也组成了含有果蝇触角转录因子穿透序列Smac 9肽（AVPIAQKSE），运用极化荧光剖析技能证明Smac9肽不只能够和XIAP的BIR3区结合，相同也可和Livin的BIR区结合[7]。Sun等运用核磁共振分光法证明Smac多肽也可相似结合XIAP与survivn结合[ 8]。 IAP宗族成员在多种人类恶性肿瘤中表达显着增高，以Survivin, XIAP，c-IAP1,c-IAP2, Livin为著。如肺癌（85.5％）、胰腺癌（88％）、食道癌（70%）、结肠癌（53%）、乳腺癌（60％）、结肠癌（53.2％）、膀胱癌（58％）和胃癌（68％）表达surviv