第一章内部结构鉴定4CE、XA.pptVIP

第一章 结构鉴定;8毛细管电泳;所谓电泳就是带电粒子或离子在电场的作用下作定向移动。 1809年，俄国物理学家Peace首次发现电泳现象。 1937年，瑞典科学家Tiselius首先将电泳作为分离技术，创造了Tiselius电泳仪，首次从人血液中分离出五种蛋白，并于1948年获得诺贝尔化学奖。分辨率有限，而且产生的焦耳热会引发对流，导致区带扰乱。 50年代以后，出现了各种抗对流支持介质：滤纸、醋酸纤维、琼脂凝胶和淀粉凝胶的区带电泳。 1959年，Raymond和Weint利用人工合成的凝胶作为支持介质，创造了聚丙烯酰胺凝胶电泳，极大地提高了区带电泳的分辨率。广泛地应用于生物大分子的分离。;1981年，Jorgenson和Lukacs，使用75μm内径100cm长的玻璃毛细管在30kv的高电压下进行电泳，获得了数十万理论板数的高分离效率，使该技术有了突破性进展。 1989年以后，毛细管电泳商品仪器及高灵敏度在线检测器。 应用范围广：最初认为它主要用于生物大分子的分析，现已经证明它能用于氨基酸、手性药物、维生素、农药、无机离子、有机酸、染料、表面活性剂、肽和蛋白质、碳水化合物、低聚核苷酸和DNA片段，甚至整个细胞和病毒粒子的分离。 本章内容简单介绍毛细管电泳，主要阐述毛细管凝胶电泳在生物高分子分析中的应用。;8.1毛细管电泳分类及特点8.1.1分类;1、区带电泳(Zone Electrophoresis)：不同的溶质在均一的缓冲溶液(或称载体电解质)系统中分离成独立的区带，如果用光密度计扫描可得出一个个互相分离的峰，与洗脱色谱的图形相似。电泳的区带随时间延长扩散严重，影响分辨率。以凝胶作为载体电解质时，抑制了组分扩散，又兼有分子筛的作用，故分辨率大大提高，应用最广。 2、移界电泳：只能起到部分分离的作用，如将浓度对距离作图，则得出一个个台阶状的图形，与色谱法前沿分析的图形相似。最前面的成份是纯的，其他则互相重叠，各界面可用光学方法显示，这是Tiselius最早建立的电泳方法。;;毛细管电泳是指所有在极细毛细管内进行的电泳，根据分离原理的不同，分为五种不同的分离模式： 自由溶液毛细管电泳(Free Solution Capillary Electrophoresis，FSCE) 毛细管胶束电动色谱(Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography，MECC) 毛细管凝胶电泳(Capillary Gel Electrophoresis，CGE) 毛细管等电聚焦(Capillary Isoelectric Focusing，CIF) 毛细管等速电泳(Capillary Isotachophoresis，CITP)。 各分离模式所要求的载体电解质和分类见表。;8.1.2毛细管电泳与常规电泳比较;8.1.3毛细管电泳与高效液相色谱比较;8.1.4毛细管电泳特点;8.2毛细管电泳仪;8.3毛细管凝胶电泳基本原理; ;溶质在凝胶中的迁移率等于溶质在自由溶液中的迁移率乘以ξ≥Rg的概率，即： μ = μ0Р（ξ ≥R g） μ0 、μ溶质在自由溶液、凝胶中的迁移率；ξ凝胶的平均孔径；R g溶质的半径；Р为ξ≥R g的概率。 根据凝胶孔径与浓度的关系可推出：μ ＝μ0exp[-K Cp(γ + R g )2] K为比例常数；Cp为凝胶或聚合物的浓度；γ为凝胶聚合物链的厚度。一般R g??γ，有：μ＝μ0exp(-KCpRg2) 表明㏒μ与聚合物浓度C成线性，其斜率与Rg2成正比。 Ogston 模型中把溶质看成是刚性小球，当溶质半径大于孔径时，溶质的迁移率为0，不能分离，但事实上，大部分溶质都是柔性的链状分子，即使R g??ξ也能分离，因此产生了爬行模型。;爬行模型认为，当长链柔性大分子通过聚合物网络时，象蛇一样头部先通过，溶质迁移过程就象爬行运动，运动的摩擦系数为f，可导出f与分子体积的平方成正比： f ∝ N2 ;8.4毛细管凝胶电泳在高分子材料分析中的应用;;9 X射线分析;9 X射线分析;X射线的波长位于0.001 ～10nm之间，与物质的结构单元尺寸数量级相当。X射线衍射技术是利用X射线在晶体、非晶体中衍射与散射效应，进行物相的定性和定量分析技术。当一束单色的X射线照射到试样上时，可观察到两种过程： （1）如果试样具有周期性结构(晶区)，则X射线被相干散射，入射光与散射光之间没有波长的改变，这种过程称为X射线衍射效应，若在大角度上测定，则称之为广角X射线衍射(Wide Angle X-ray Diffract