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第十二章 转基因动物培育技术;第一节 实验动物胚胎工程的基本内容;五、胚胎分割(Embryo split) 六、体外受精(In Vitro fertilization) 七、显微受精(Microfenilization)又称辅助受精 (Assisted fertilization) 八、细胞核移植(Nuclear transplantation) 九、卵的激活与孤雌发育(Ocyte activation and parthenogenetic development) 十、胚胎干细胞(Embryonic stem cell)简称ES细胞 ;第二节 实验动物冷冻胚胎库的建立 ; 2．试剂药品 3．溶液配制 4．操作程序 (1)超数排卵 (2)采集胚胎 (3)挑选胚胎 (4)胚胎冻存 (5)资料 (6)入库的各品种品系胚胎，必须分2份以上，放存在不同罐内和不同地方 (7)当需要使用胚胎和检测胚胎时，取出机动胚胎管，按冻存方法条件，采用相应的解冻方法解冻、复苏 (8)每个品种品系冻存胚胎数量 ;第三节 试管动物的培育 ; 4．受精卵培养 5．胚胎移植 二、试管兔的培育 (一)几种溶液的配制 1．培养液成份 2． PBS液 3．TCM—199液配制 4．DM(Defined Medium) (二)精液采集和获能 1．采集精液 2．精子获能 (三)供体母兔超排 ; (四)受体母兔同步发情 (五)供体母兔注射HCG (六)体外受精 (七)受精卵培养 (八)胚胎移植 三、试管猕猴的培育 (一)溶液配制 (二)超排 (三)采卵 (四)采精与精子获能 1．电刺激采精器 2．用直肠探子法的采精技术 ;第十二章 转基因动物培育技术;一. 概况;;定义 采用基因转移技术使目的基因整合入受精卵细胞或胚胎干细胞，然后将细胞导入动物子宫，使之发育成个体。 ;; 激素转基因鼠(硕鼠)，右边为同胞鼠对照。 ;核转移技术 即动物整体克隆技术，将动物体细胞核全部导入另一个体的去胞核的受精卵内，使之发育成个体，即克隆(clone)。;基因剔除技术 也称基因靶向(gene targeting)灭活，有目的去除动物体内某种基因的技术。; 转基因动物（transgenic animals）是指染色体基因组中整合有外源基因并能遗传给后代的一类动物。 整合到动物染色体基因组的外源基因被称为转基因(transgene) 。 转基因技术则是指制备转基因动物所需的一套技术，它涉???外源基因的组建、载体、受体、基因导入技术、供转基因胚胎发育的体外培养系统和宿主动物等许多方面。;二 、克隆动物 ;2.研究现状; 在农业方面，转基因农业动物研究有了很大进展，尤其在通过胚胎细胞或体细胞将基因导人牛、猪、羊和山羊，产生可遗传的转基因牲畜方面发展很快。说明转基因牲畜不仅可作为生物反应器，为人类生产基因工程产品和用于牲畜品种改良，提供更好的服务，同时也促进了胚胎学和发育遗传学的飞速发展，并开拓了医学研究的新领 ; 人类培育出的第一只转基因猴“安迪”。于2000年10月2日在美国出生。 ; 2003年11月21日，美国得克萨斯的一家公司宣布，经过转基因技术他们已经研制出能发荧光的小型热带鱼———“荧光鱼; 2004年6月30日由中国军事医学科学院主持，山东农业大学、莱阳农学院等单位共同参与首批28只带有t-PA组织型纤溶酶原激活剂的转基因羊，在山东省东营市天翼公司陆续降生。t-PA是目前治疗急性心肌梗塞最好的溶血栓药物，;二、转基因动物培育的原理和方法;2.关键技术: （ 1）外源目的基因的制备 （2）外源目的基因的有效导入 （3）胚胎培养与移植 （4）外源目的基因表达的检测; ; 是指利用重组DNA技术将目的基因 和载体重组，再导入受体细胞内进行扩 增和表达的过程。 ; 是指通过无性繁殖过程所产生的 与亲代完全相同的子代群体。基因工 程相当于目的基因的无性繁殖过程， 也称其为基因克隆(gene cloning)。 ;;（1）工具酶; 限制性内切酶;作用：与甲基化酶共同构成细菌的限制修饰系统， 限制外源DN