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（建筑工程管理）基因 工程概念辨析 基因工程概念辨析 浙江省奉化中学任布君（315500） 壹、基因工程基因工程又叫做基因拼接技术 DNA 重组技术，这种技术是在生物 体外，通过对 DNA 分子人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合， 然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所 需要的基因产物，或者让它获得新的遗传性状。 二、限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶简称限制酶。它主要存在于微生物中，壹 种限制酶只能识别壹种特定的核苷酸序列，且且能在特定切点上切割 DNA 分子。 限制性核酸内切酶有俩种不同的切割方式：壹种是切割位置是平齐的，即在识别序 列内同壹位置上的核苷酸处进行切割，产生的 DNA 片段不带粘性末端而是没有单 链突出的平齐末端，如：壹种限制酶的识别序列为 AGTACT ，其酶切点在AT 之间（见 下图）。另壹种是切割位置是交错的。切割位置是交错的切割方式能够形成俩个粘 性末端。例如，从大肠杆菌中发现的壹种限制性核酸内切酶只能识别 GAATTC 序 列，且在 G 和 A 之间将这段序列切开（见下图）。限制性核酸内切酶能够把 DNA 分子切割成不同的片段，这样就能够得到我们所需要的目的基因了，且使得 DNA 重组成为可能。 三、DNA 连接酶 DNA 连 接酶催化 DNA 中相邻的 5′磷酸基和 3′羟基间形成磷酸二酯键，使 DNA切口封合，连 接 DNA 片段。即它能够将限制性核酸内切酶切割下来的基因（DNA 片段）和另外 被切割开的 DNA 分子（如载体）连接到壹起，形成重组 DNA 分子（见下图）。 四、基因工程载体将外源基因导入受体细胞，需要有运输工具，这就是基因工程载 体。作为基因工程的载体必须具备以下几个条件作用：能在宿主细胞内复制且稳定 地保存；具有多个限制酶切点，以便和外源基因连接；具有某些标记基因，便于进 行筛选。常用的基因载体有质粒、噬菌体和动植物病毒。 五、质粒质粒是基因工程最常用的运载体，它存在于许多细菌以及酵母菌等生物中， 是细胞内能够自主复制的很小的环状 DNA 分子，最常用的质粒是大肠杆菌的质粒。 大肠杆菌的质粒中常含有抗药基因，如抗四环素的标记基因。细菌质粒的大小只有 普通细菌拟核 DNA 的百分之壹左右。质粒能够“友好”地“借居”在宿主细胞中。壹般 来说，质粒的存在和否对宿主细胞生存没有决定性的作用。可是，质粒的复制则只 能在宿主细胞内完成。土壤农杆菌的质粒常用于培育转基因植物。 六、目的基因是指人们所需要的特定基因，如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因、植物的 抗病基因、人的胰岛素基因等，都是目的基因。目前获取目的基因大致有如下俩条 途径：壹条是从供体细胞的 DNA 中直接分离基因；另壹条是人工合成基因。 直接分离基因的方法主要是：采用物理方法(剪切或超声波)或限制性内切酶将染色 体 DNA 切割成许多片段，然后将它们和适当载体结合，将重组 DNA 转入受体菌中 扩增，每个细菌内都携带壹种重组 DNA 分子的多个拷贝。再结合适当筛选方法从 众多的转化子菌株中选出含某壹基因的菌株，扩增分离得到目的基因。 人工合成基因的方法主要有俩条途径：壹是以 mRNA 为模板，利用反转录酶合成 和 mRNA 互补的 DNA ，再复制成双链DNA 片段，从而获得所需要的目的基因。 另壹条途径是：如果已知某基因的核苷酸序列，或根据某种基因产物的氨基酸序列 推导出该多肽编码基因的核苷酸序列，再利用 DNA 合成仪通过化学合成原理合成 目的基因。 七、重组 DNA 分子在体外将目的基因和运载体 DNA （如质粒、病毒等）结合成的 DNA 分子，即重组 DNA 分子。如让胰岛素基因和大肠杆菌质粒重组形成重组 DNA 分子。过程主要为：用切取胰岛素基因的限制酶切割大肠杆菌质粒，形成和胰岛素 基因具有相同的的粘性末端的开口的 DNA 分子，借助于 DNA 连接酶使得胰岛素基 因和大肠杆菌质粒形成重组 DNA 分子。 九、筛选含有目的基因的受体细胞目的基因是否导入受体细胞要进行筛选，因为且 不是所有的受体细胞都含有目的基因。如：质粒作为载体的基因工程，因为质粒上 有抗生素基因（如抗四环素基因），所以含有这种重组质粒的受体细胞就能够在有 四环素的培养基中生长，而没有导入重组 DNA 分子的细胞则不能在这种培养基上 生长，这样就能够筛选到含有重组 DNA 分子的受体细胞。 十、目的基因的表达这是基因工程的最后步骤，作为基因工程完成的最后标志。通 过目的基因的转录和翻译，产生出人类所需要的基因产物，或