试验九玻璃器皿的清洗包扎培养基的制备及灭菌.ppt

实验九 玻璃器皿的清洗包扎， 培养基的配制及灭菌 一、目的要求 ? 1 、明确培养基的配制原理。 ? 2 、通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，掌握配制 培养基的一般方法和步骤。 ? 3 、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围 ? 4 、了解干热灭菌的原理和应用范围。 ? 5 、了解紫外线灭菌的原理和方法。 ? 6 、玻璃器皿的清洗包扎要熟练操作。 二、基本原理 ? 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普 通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。 它含有牛肉膏、蛋白胨和 NaCl 。其中牛肉膏为 微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要 提供氮源，而 NaCl 提供无机盐。在配制固体培 养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在 常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸 水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂 烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分 解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的 质量和气温的不同而有所不同。 由于这种培养基多用于培养细菌，因此， 要用稀酸或稀碱将其 pH 调至中性或微碱性， 以利于细菌的生长繁殖。牛肉膏蛋白胨培 养基的配方如下： 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15 ～ 20g 水 1000ml pH 7 ． 4 ～ 7 ． 6 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋 白质凝固变性而达到灭菌的目的。 ? 紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，波长 为 200 — 300nm 的紫外线都有杀菌能力， 其中以 260nm 的杀菌力最强。 为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外 线灯以前，可在无菌室内（或接种箱内） 喷洒 3 — 5 ％的石炭酸溶液，一方面使空 气中附着有微生物的尘埃降落，另一方 面也可以杀死一部分细菌。 超净工作台内紫外灯（线）灭菌 三、器材 ? 牛肉膏，蛋白胨， NaCl ，琼脂； 1mol/L NaOH ， 1mol/L HCl ； 试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培 养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸 汽灭菌锅， pH 试纸（ pH 5 ． 5 ～ 9 ． 0 ）， 棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。 ? 培养皿，试管，吸管，电烘箱等。 ? 牛肉膏蛋白胨培养基，培养皿（ 6 套一包）， 手提式高压蒸汽菌锅等。 ? 紫外线灯， 3 ～ 5 ％石炭酸或 2 ～ 3 ％来苏尔 溶液，牛肉膏蛋白胨平板 。 四、操作步骤 ? 一、称量 ? 准确、迅速，一种药品一把药勺，勿盖错 药瓶盖 ? 二、溶化 ? 水的加法、加热搅拌 ? 三、调 pH ? 忌调过头后来回调 培养基的制备 ? 四、过滤 ? 五、分装 ? 1 、液体分装：试管高度的 1/4 左右 ? 三角瓶容积的 1/2 ? 2 、固体分装：试管高度的 1/5 左右（制斜面） ? 半固体： 1/3 左右（垂直穿 刺） ? 马丁氏培养基 —— 定容 ；瓶口棉塞 培养基的制备 ? 六、加塞 ? 七、包扎 ? 八、灭菌 ? 一般 15 磅（ 121 ℃ ） 20 分钟 ? 九、摆斜面 ? 温度、斜面长度（试管的 1/2 ） ? 十、无菌检查 ? 37 ℃ 培养 24 — 48 小时 常用培养基 ? 一、牛肉膏蛋白胨培养基 ? 应用最广泛的 细菌基础培养基 。 ? 配方： ? 牛肉膏 3.0g ? 蛋白胨 10.0g ? NaCl 5.0g ? 水 1000ml ? pH 7.4-7.6 常用培养基 ? 二、高氏 Ⅰ 号培养基 ? 用于培养、观察放线菌形态特征； ? 加入适量的抗菌物质（抗生素、酚）用于 分离放线菌（选择性培养基）。 常用培养基 ? 高氏 Ⅰ 号培养基配方： ? 可溶性淀粉 20g 按配方顺序依次溶解否则 ? NaCl 0.5g 产生沉淀 ? KNO 3 1.0g ? K 2 HPO4.3H 2 O 0.5g 抗生素现用现加 , 温度不宜 ? MgSO 4 .7H 2 O 0.5g 过高否则易分解 ? FeSO 4 .7H 2 O 0.01g ? 琼脂 15-25g ? 水 1000ml ? pH 7.4-7.6 常用培养基 ? 三、马丁氏培养基 ? 用于分离真菌的选择性培养基 ? 配方： ? KH 2 PO4 1.0g 另加孟加拉红和链霉素 ? MgSO 4 .7H 2 O 0.5g 抑制细菌、放线菌生长 ? 蛋白胨 5g ? 葡萄糖 10g ? 琼脂 10-20g ? 水 1000ml ? pH 自然 试管