各类高效液相色谱法 .ppt

四、固定相 化学键合相 特点： 不易流失;热稳定性好;化学性能稳定 载样量大;适于梯度洗脱 分类: 非极性键合相：ODS 中等极性键合相：醚基键合相 极性键合相：氨基、氰基键合相 * HPLC 概述 1 基本原理 2 各类高效液相色谱法 3 固定相 4 流动相 5 高效液相色谱仪 6 * 五、流动相 要求： 与固定液不反应;对样品有良好溶解度 粘度小;与检测器匹配 　 溶剂不同，与分子间作用力不同，有可能使组分的R不同，改变溶剂的极性，对组分的洗脱能力改变，tR改变，实验时可适当配比，以至得到较适宜的R。 * 五、流动相 洗脱方式: 等度洗脱(isocratic elution) 恒定配比的溶剂系统洗脱 梯度洗脱(gradient elution) 在一个分析周期内不断改变流动相的比例 优点：简便，柱易再生； 缺点：不能用于复杂组分的分离 优点：缩短分析周期；提高分离能力；改善峰形； 增加灵敏度 缺点：基线漂移 * 五、流动相 * HPLC 概述 1 基本原理 2 各类高效液相色谱法 3 固定相 4 流动相 5 高效液相色谱仪 6 * 六、高效液相色谱仪 输液泵 进样器 色谱柱 检测器 工作站 高效液相色谱仪 HPLC * 六、高效液相色谱仪 输液泵→进样器→色谱柱→检测器→工作站 泵： 恒压泵 恒流泵:柱塞往复泵 * 六、高效液相色谱仪 输液泵→进样器→色谱柱→检测器→工作站 六通阀： 优势：进样量准确，重现性好，可带压进样。 * 六、高效液相色谱仪 输液泵→进样器→色谱柱→检测器→工作站 色谱柱：由柱管(不锈钢管)和固定相组成 分析柱 φ2-4.6mm L10-25cm 常量柱 φ1-1.5mm L10-20cm 常微量柱 制备柱 φ20-50mm L3-25cm * 返回章目录 返回章目录 返回章目录 高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography 分析化学教研室 严拯宇 * ppt课件 高效液相色谱法 概述 1 基本原理 2 各类高效液相色谱法 3 固定相 4 流动相 5 高效液相色谱仪 6 小结 习题及解答 * 一、概 述 高效液相色谱法：以经典液相色谱为基础，在气相色谱的理论和实验方法基础上建立的一种分离分析方法。 简称：HPLC；HRLC；HSLC； UPLC 超高效液相色谱（Ultra Performance Liquid Chromatography） 与经典LC相比——高效 ◇ 高效填料：3～5μm ◇ 高压泵输液 ◇ 高灵敏度的检测器:在线检测 * 一、概 述 分析对象 流动相差别 GC 能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，占有机物的20% 惰性气体 HPLC 不受样品挥发性和热稳定性的限制，占有机物的80% 液体，种类较多，选择余地广 HPLC与GC区别 * 一、概 述 HPLC仪器示意图 * 一、概 述 HPLC仪器图 SHIMAZU AGILENT WATERS * 一、概 述 特点 ◇ 适用范围广 ◇ 高效 ◇高速 ◇高灵敏度（主要用UV 5×10-10g/ml） ◇流动相选择范围宽 ◇柱可以反复使用（可用1-2年） ◇流动组分易收集 ◇安全 * 高效液相色谱法 概述 1 基本原理 2 各类高效液相色谱法 3 固定相 4 流动相 5 高效液相色谱仪 6 * 二、基本原理 范氏方程（van Deemter equation)： GC： 填充柱 H = A + B/μ + Cμ HPLC： H = A + Cμ 原因：T↓；η↑； μ↑→ 忽略B/μ * 二、基本原理 GC和HPLC的H-u图 1 B/μ 2 Cμ 3 A 4 HPLC的μopt 5 GC的μopt * 二、基本原理 HPLC： H = A + Cμ A=2λdρ C=Cm+Csm 影响因素： λ ↓ 选球形固定相，高压、匀浆装柱法 dρ↓ 选粒径小的化学键合相 C↓ 选粘度小、低流速的流动相 范氏方程（van Deemter equation) * 二、分离度及影响因素： 又可： 讨论如何由n、α、k 来改变R * 1、 k↑， R↑ ， k最适宜范围1k5