05细胞培养培养基制备26相差显微镜1.ppt

用酒精喷软纸将超净工作台平台及工具擦拭干净。 细胞培养技术 细胞培养（ cell culture) 细胞培养技术是选用各种细胞的最佳生 存条件对活细胞进行培养和研究的技术。 即：从活体中取出小块组织分离出细胞， 在一定条件下进行培养，使之能继续生存、 生长、增殖的一种方法。 细胞培养（ cell culture) 是指用机械或化学的方法将 组织分散成单个细胞而进行的培 养。 组织培养（ tissue culture) 是指把活体的组织取出分成小 块，直接置于培养瓶底或通过胶原 纤维血浆支持物的培养瓶底来进行 培养。其特点是：组织不失散，细 胞保持原有的组织关系。 器官培养（ organ culture ） 是将活体中器官或器官一部分 取出，在体外生长、生存，并使其 保持器官原有的结构和功能特征的 培养。其特点是：培养的器官在合 适的条件下能生长和分化，存活数 周或 1 年。 细胞培养常用术语 ? 原代培养（ primary culture ）： 从直接取 自生物体细胞、组织或器官开始的培养。 ? 传代培养（ passage culture ）： 将细胞以 一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即 称为传代培养。 注： 传代（ passage ， subculture ） ? 细胞系（ cell line ）： 原代培养经首次传代成功 后即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的 细胞世系所组成。 ? 细胞株（ cell strain ）： 通过选择法或克隆形成 法从原代培养物或细胞系中获得的特殊性质或 标志，并能稳定保持这些特性的培养物。 ? 克隆（ clone ）： 指单个细胞通过有丝分裂所产 生的遗传性状相同的细胞群体。 生物安全柜 超净工作台 细胞培养的设施 - 培养室 漳州校区细胞实验课使用的细胞培养间 ….. 水浴锅 高压灭菌锅 培养瓶 培养皿 培养板 CO 2 培养箱 倒置显微镜 普通显微镜 ? 培养基 培养基 血清 胰酶 双抗 (Penicillin-Streptomycin) 细胞培养基主要成分 水 糖 氨基酸 维生素 无机离子和微量元素 促生长因子 常见的商品化细胞培养基有 :DMEM 、 MEM 、 PRMI-1640 、 M199 、 Ham s/F12 等 1 、血清的种类 胎牛血清：剖腹产的胎牛 牛血清 新生牛血清：出生 24h 之内的新生牛 小牛血清：出生 10 ～ 30d 的小牛 （人血清、马血清、羊血清、鸡血清） 2 、血清的主要成分及主要作用 血清是由血浆去除纤维蛋白而形成，血 清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水 化合物、生长因子、激素、无机物等，这些 物质对促进细胞生长活性是达到生理平衡的。 血 清 血清的主要作用 ? 提供基本营养物质 ? 提供贴壁和扩展因子（ FN 、 LN ） ? 提供激素及各种生长因子 （ FGF 、 EGF 、 PDGF) ? 提供结合蛋白 ? 对培养中的细胞提供某些保护作用 血清的使用与储存 ? 使用前的处理 56℃灭活 30min → 去除补体 ( 可促进细胞溶 解 ) 成分 , ? 储存条件 灭活后分装成小包装（ 10mL 、 20mL 、 50mL ）， －20 ℃储存；使用前4 ℃融化。 ? 使用浓度 一般为 2 ％～ 20 ％，最常用的是 10 ％。 影响细胞生长的因素 - 温度 一般哺乳类及禽 类细胞体外培养 的适宜温度 37 ～ 38℃，温度过高 或过低都会影响 到细胞的生长。 温度对细胞生长的影响 二氧化碳（ CO 2 ） ? 大多数细胞适于在 pH 7.2 ～ 7.4 条件下生长，低于 pH 6.8 或高于 pH 7.6 对细胞有害，甚至造成细胞退化或死亡。 ? 动物细胞培养要求有 5% 的 CO2 ，这是为了维持培养基的 pH 稳定。因为培养基中使用的