结核分枝杆菌实验活动风险评估分析报告.docVIP

第六节 结核分枝杆菌试验活动风险评定汇报 生物因子 （一）通常特征 结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis)，于1882年由德国微生物学家Koch发觉并证实为结核病病原菌。1886年，Lehman和Neuman正式将其命名为结核分枝杆菌，又称结核菌。 1.形态和染色 　　结核分枝杆菌细长略弯曲，端极钝圆，大小约（1～4)μm×(0.3～0.6)um ,呈单个或分枝状排列，有时呈V、Y、人字型排列，无鞭毛和芽孢。多数学者认为结核分枝杆菌无荚膜。结核分枝杆菌常见萋-尼氏（Ziehl- Neelsen)抗酸性染色法染色，染色后结核分枝杆菌展现红色，其它非抗酸性细菌呈蓝色。结核分枝杆菌除正常经典杆状形态外，在陈旧病灶和培养物中，形态常不经典，可呈颗粒状，串球状，短棒状，长丝形等；或受物理原因、化学原因，和药品等原因影响，而展现异常改变；另外，还有可经过在内在电镜下观察细菌滤膜滤过型、细胞壁缺损或丧失细胞壁缺点L型，和存在于结核病灶、浆液性渗出液等样品可看到革兰染色阳性颗粒球状微粒型。 2.生长特征和培养　　 结核分枝杆菌为缓慢生长细菌，较一般细菌生长十分缓慢，在动物体内繁殖代时约为15h,在家兔角膜中约需要20～22h，在巨噬细胞内月需要15～20h。体外生长时营养要求高，可在含有蛋黄、马铃薯、甘油和天门冬素或动物血清等固体培养基上生长。最适PH6.4～7.0，在35～40℃可生长，最适温度为35～37℃。常见培养基有罗氏培养基、小川培养基、油酸血清（白蛋白）琼脂培养基和苏通液体培养基等，在良好培养条件下，生长代时约18～24h，培养2～4周才出现肉眼可见菌落。在固体培养基上菌落呈颗粒、结节或花菜状，乳白色或米黄色，不透明；而在液体苏通培养基内呈粗糙皱纹状菌膜生长。 3.生化反应 结核分枝杆菌能够产生硝酸盐还原酶，可使硝酸盐还原为亚硝酸盐；在酸性条件下，亚硝酸盐和氨基苯磺胺、N-甲萘基乙烯二铵盐酸盐形成红色偶氮化合物。牛分枝杆菌和部分非结核性分枝杆菌不能产生硝酸盐还原酶，所以可用于结核分枝杆菌和牛分枝杆菌判别。结核分枝杆菌缺乏烟酸酶，故不能分解代谢过程中产生烟酸，在培养中，结核分枝杆菌生长时烟酸聚集量较牛分枝杆菌及其它分枝杆菌高。烟酸砒啶环氮和联苯胺及溴化氰作用后，展现桃红色或红色沉淀反应。经过烟酸试验能够将结核分枝杆菌同其它分枝杆菌区分。 4.免疫学特征 抗结核免疫反应在结核分枝杆菌感染中起着根本作用，免疫系统能有效地抵御大多数感染，感染结核分枝杆菌大多数人（约90%）在其一生中并不能发展成患有结核病。然而，当和免疫系统疾病同时存在时，如合并感染人类免疫缺点病毒（HIV）,发展为结核病机会就会大大增加。 结核分枝杆菌是胞内感染菌，其免疫关键是以T细胞为主细胞免疫。当结核分枝杆菌侵入人体内，被巨噬细胞吞噬后，未活化巨噬细胞抗菌活性弱，不能预防所吞噬结核分枝杆菌生长，但可递呈抗原，使周围T淋巴细胞致敏。致敏淋巴细胞可产生多个淋巴因子，如IL-2、IL-6、INF-γ。这些因子和TNF-α共同作用可杀死结核分枝杆菌。 结核分枝杆菌免疫属于感染免疫，又称有菌免疫，即只有当结核分枝杆菌或其组分存在体内时才有免疫力。一旦体内结核分枝杆菌或其组分全部消失，则免疫也随之不存在。 5.遗传特征 结核分枝杆菌基因序列有4400多万bp，包含了4000多个基因，有很高鸟嘌呤（G）和胞嘧啶（C）含量。结核分枝杆菌基因组在进化过程中形成了不一样分枝，关键有北京家族、东非-印度分枝、中亚或德里家族、哈勒姆家族、拉丁美洲和地中海家族等，其中北京家族有高毒力和高致病性。 耐药性 结核分枝杆菌产生耐性机制关键是靶编码基因突变所致。结核分枝杆菌自然耐药突变率为10-10～10-5之间。当结核分枝杆菌编码基因发生突变后，其对耐药敏感性表型发生改变，这么突变是随机、自发，并和是否和药品接触无关。在一个菌群中，耐药个体出现是以一定频率产生，并伴随药品对敏感菌体杀灭选择作用，耐药菌体百分比逐步增加，直至成为耐药菌优势菌群。耐药结核分枝杆菌能够分为原发耐药、初始耐药和继发耐药，但结核分枝杆菌会出现交叉耐药情况，即对一个药品产生耐药后，同时又对另一个药品也产生敏感性改变。 起源 结核杆菌可侵犯全身各器官，但以肺结核为最多见。结核病是一个古老疾病，可能有了人类以后，很快就有了它存在。1965年，法国学者Sylvius依据解剖了死于所谓“消耗病”或“痨病”人尸体，发觉肺脏及其它器官有颗粒状病变，依据其形态特征称之为“结核”。1973年，湖南长沙马王堆汉墓出土21前女尸身上发觉左上肺门全部有结核病灶。所以，结核名称就此被应用至今。 传染性 因结核病病变进展患者痰中带有大量结核杆菌，故这类患者是结核病关键传染源，痰中结核杆菌越多，传