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药敏试验方法： K-B 法： 从孵育了 16-24 小时的琼脂平板上（血平板） ，挑出单个菌落，直接用生理盐水制成 0.5 麦氏单位。 在 15 分钟内， 用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多 的菌液。 用棉拭子在无菌的 M-H 培养基表面化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动 60 度，每次接种都应 保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。 将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。每个纸片都应压一下，以保证与平板表面完全接触。每个纸片中 心间距 24mm 。纸片一旦与平板接触，不应再移动。 贴完纸片后，应在 15 分钟内放入 35 度孵箱。嗜血杆菌属，链球菌属放入 3%-5%的 CO2 烛缸。 6孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与 NCCLSF册比较，作出结果判断。 说明：细菌药敏结果的判断以 NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照 NCCLS操作，否则将失 去意义。链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单抱菌和不动杆菌外的假单抱菌属不用 K-B法. 肺炎链球菌胶乳凝集测定法 在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。 从冰箱取出鉴定试剂 （Slidexpneumo-kit） 于室温。 3在其中一滴生理盐水上滴加 R1试剂，在另外一滴上滴加 R2试剂，用搅拌棒混匀。 轻轻晃动玻片 2 分钟，观察结果。 2分钟内，女口 R1出现凝集为阳性；如 R1和R2均未出现凝集为阴性。 注：R3为阳性对照。 药敏纸片的选择 1 、革兰阴性杆菌（肠杆菌科） 头抱噻肟（CTX头抱唑林（CZ头抱他定（CAZ） 氨苄西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN） 头抱噻吩（CF环丙沙星（CIP）头抱呋辛（CXM） 庆大霉素（ GM ）头孢噻肟 /棒酸（ CTX/CA） 头抱他定/克拉维酸（CAZ/CA羧苄青霉素（CB） 奥格门丁（ AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦（PIP/TZ 亚安培南头孢匹肟（ FEP 头孢克罗（ CEC 2、 铜绿假单孢菌 /不动杆菌 妥布霉素（ TM 阿米卡星（ AN 安曲南（ AZT 头孢哌酮（ CFP 哌拉西林（ PIP 头孢匹肟 头孢噻肟（ CTX 环丙沙星（ CIP 头孢他定（ CAZ 左旋氧氟沙星（ OFL 亚安培南哌拉西林 /三唑巴坦 3、 金黄色葡萄球菌 苯唑西林（ OX 青霉素 G（ P 头孢唑林（ CZ 阿米卡星（ AN 红霉素（ E 头孢噻肟（ CTX 环丙沙星（ CIP 万古霉素奥格门丁（ AMX/CA 哌拉西林 /三唑巴坦 头孢噻吩（ CF 4 、肠球菌 氨苄西林（ AM 万古霉素环丙沙星（ CIP 庆大霉素（ GM 红霉素（ E 氧氟沙星（ OFL 5、除肺炎链球菌外链球菌 氨苄西林（ AM 头孢噻肟（ CTX 万古霉素 红霉素（E）氧氟沙星（OFL克林霉素（CM） 肺炎克雷伯菌产酸克雷伯菌和大肠杆菌 ESBLs的检测 MH 培养基上贴头孢他定，头孢他定 /克拉维酸，头孢噻肟 /棒酸，安曲南。 如头抱他定的抑菌圈＜22mm，安曲南＜27mm，头抱噻肟＜27mm，意味可能有 ESBL沪生。 如头抱他定/克拉维酸与头抱他定，头抱噻肟 /棒酸与头抱噻肟的差值 ＞5mm贝U确证ESBL沪生。 耐药机制。 一代头孢对普通变形杆菌、枸橼酸杆菌、肠球菌、假单孢菌属、沙雷氏菌属、拟杆菌属无效。第二代头孢 对假单孢菌属、不动杆菌属、沙雷氏菌属、肠球菌无效；肠球菌对头孢类天然耐药。氨基糖甙类抗生素阿 米卡星与庆大霉素不完全交叉耐药。红霉素类、四环素类等抗生素内部有相互交叉耐药。 金黄色葡萄球菌耐万古霉素、无乳链球菌耐青霉素和氨苄青霉素、无乳链球菌和 D 群链球菌耐万古霉素和 替拉考宁为不可能的表型。 洋葱伯克霍德菌对氨基糖甙类、亚安培南天然耐药。 除表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌外，替拉考宁耐药的凝固酶阴性的葡萄球菌不常见。 金黄色葡萄球菌对复方新诺明耐药为罕见表型。 氨苄青霉素对非发酵类不宜应用。 对于葡萄球菌，苯唑西林耐药，青霉素敏感是不可能的。 NCCLS关于细菌药敏实验的说明 总评论： 1、 头孢噻吩可以代表头孢噻吩、头孢匹林、头孢拉定、头孢氨苄、头孢克洛、和头孢羟氨苄。但是，头孢 唑林、头孢呋辛、 头孢泊肟、 头孢丙烯应单独测试， 因为某些对这些药物敏感的菌株对头孢噻吩是耐药的。 2、 利福平不能单独用于化疗。 肠杆菌科 1 对于沙门菌属和志贺菌属只有氨苄西林、喹诺酮、和甲氧苄啶 /磺胺甲恶唑可用于常规试验与报告。初此 之外，对于沙门菌属和志贺菌属的肠道外分离株，应测试并报告氯霉素和一种三代头孢菌素。 2、 克雷伯菌属和大肠艾希菌的产 ESBLSt对青霉素、头抱菌素类或安曲南临床治疗可显耐药性，尽管在体 外药敏试验对其中某些抗生素敏感。对于所有产E