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牡丹籽油抗炎作用的分子机理研究 牡丹籽油 (peony seed oil,PSO) 属于新食品资源 , 被专家评为优质食用油 , 是从牡丹籽中提炼的金黄色透明液态油。 不饱和脂肪酸是 PSO中最重要的活性成 分 , 其中亚麻酸的含量所占比例为 60%。 研究表明 PSO具有许多生理功能 , 最近研究显示 PSO可能具有抗炎生物活性 , 但其具体抗炎功能分子机制尚无文献报道。 本实验研究利用细胞和动物炎症模型 : 葡聚糖硫酸钠 (sodium dextran sulfate,DSS) 诱导 ICR 小鼠构建体内炎症模型和 脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS) 刺激 RAW264.7巨噬细胞构成体外炎症模型 , 共同对 PSO抗炎功能进行评估及对抗炎作用的分子机理进行初步探究。 实验结果为牡丹籽深加工及牡丹籽油保健食品的开发提供参考。 实验观察发 现 :PSO干预组小鼠比 DSS组精神状态明显好转 , 便稀、便血小鼠数量减少或无 , 结直肠病变程度减轻 , 疾病活动指数 (disease activity index,DAI) 评分降低趋 势显著。 使用苏木精 - 伊红染色法 (hematoxylineosin staining,HE) 检测小鼠结肠 组织病变情况 , 显微镜下采集图片分析比较可知 ,DSS组小鼠病变情况如下 : 黏膜 大面积糜烂 , 腺体隐窝结构完整性破坏较严重 , 有大量的炎性细胞如淋巴细胞及 伴中性粒细胞等浸润 , 杯状细胞数量显著减少 , 呈现出溃疡性结肠炎症状 ; 而 PSO 干预组小鼠结肠出血较少 , 炎性细胞有少量浸润 , 结肠黏膜糜烂状况减轻 , 隐窝结 构排列较为整齐、 形态较为完整。通过测定小鼠血浆中组织损伤因子髓过氧化物 (myeloperoxidase,MPO) 、丙二醛 (malondialdehyde,MDA), 发现 DSS组中 MPO 和 MDA和分别升高为对照组的 3.5 和 3.2 倍。 同时也发现小鼠结肠组织损伤炎症介质一氧化氮 (nitrite/nitrate,NO) 含 量升高了 4.2 倍 ; 相比于 DSS组,PSO组 MPO、MDA和 NO含量分别降低了 20%、26% 22%。从生化指标的角度 , 发现 PSO能减少 DSS诱导的小鼠损伤。荧光实时定量 PCR技术 (real time-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR) 和蛋白质免疫印迹技术 (westernblotting,WB) 检测发现 , 与 对照组相比 ,DSS组小鼠结肠组织中环氧化合酶 -2(cyclooxygenase-2,COX-2) 、 肿瘤坏死因子 - α(tumor necrosis factor- α ,TNF- α) 、白细胞介素 -1 β (interleukin-l β,IL-1 β) 和诱导型一氧化氮合酶 (inducible nitric oxide synthase,iNOS) 的 mRNA表达水平显著升高 , 而 PSO组相比于 DSS组分别下降 53.6%、41.0%、 50.6%和 54.2%。WB实验进一步证实了这些炎性细胞因子蛋白质 表达水平有相似结果。 检测结肠组织中丝裂原活化蛋白激酶 (mitogen-activated protein kinases,MAPKs) 信号通路关键靶基因的磷酸化表达情况。 DSS组细胞外调节蛋白 激酶 1/2 的磷酸化 (phosphorylation of extracellular regulated protein kinases1/2 、p-ERK1/2) 、c-Jun 氨基末端激酶的磷酸化 (phosphorylation of c-Jun N-terminal kinase,p-JNK) 和 p-p38 蛋白质表达量为对照组的 1.48 ± 0.23 、1.88 ±0.24 、3.21 ±0.45 倍。 PSO组分别为对照组的 1.23 ±0.15 、1.45 ±0.25 和 1.48 ±0.34 倍。结果显 PSO能抑制 MAPK信号通路的活化 , 可能与其抑制炎症因子表达相关。体外实验中通过噻唑兰 (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphe nyltetrazolium bromide,MTS) 法检测 PSO对 RAW264.7细胞毒性影响。 结果显示 PSO各组与对照组 OD值无明显差异。 说明 0～400μg/mLPSO溶液对 RAW264.7细胞的生长、状态及活力无影响 , 证明对细胞无毒性 , 可用于后续实验研究。 LPS组细胞 COX-2、TNF-α、IL