屠宰企业非洲猪瘟实验室检测及生物安全技术要求.docVIP

屠宰企业非洲猪瘟实验室检测及生物安全技术要求 一、屠宰企业非洲猪瘟检测实验室建设要求 （一）实验室布局 实验室物理分区为检测区和消毒区。 1、检测区：应进一步分为样品处理区、配液区、扩增区，严格分区操作。应配置的仪器设备及耗材有：组织破碎仪（均质器/匀浆仪）、普通离心机、涡旋振荡器、移液器及其配套吸头（样品处理区和配液区各一套移液器，不能混用）。此外，需配备冰箱至少1台（存放检测试剂、检测样品、灭菌后废弃物）、储物柜（存放EP管、PCR管、枪头等耗材）、垃圾桶2个（1个配备黑色垃圾袋，用于盛放普通垃圾；另1个配备黄色废弃物专用垃圾袋，用于盛放废弃物）。 2、消毒区：主要用于废弃物处理，应配备高压灭菌锅、纯水仪、高压灭菌袋、高压灭菌指示条。 （二）实验室仪器设备及耗材 1、仪器设备：组织破碎仪（均质器/匀浆仪）、普通离心机、涡旋振荡器、荧光PCR仪、高压灭菌锅、冷藏冷冻冰箱、移液器（量程为10ul、200ul、1ml）及配套吸头。 2、实验耗材：采血器（或注射器）、真空采血管（EDTA抗凝剂）、1.5mLEP管及其管架、PCR八联管（与荧光PCR仪配套）及其管架、剪刀、镊子等。 3、检测试剂：应使用农业农村部批准或经中国动物疫病预防控制中心比对符合要求的检测方法及检测试剂盒开展检测。 4、个人防护用品：实验服、一次性乳胶手套、一次性口罩、一次性鞋套。 （三）实验室检测人员 至少2名检测人员，负责样品检测和结果报告。检测人员应接受实验室检测技术及生物安全相关知识培训，熟悉分子生物学检测。 二、屠宰企业非洲猪瘟检测实验室操作规范 （一）样品采集 驻场官方兽医负责样品采集，并填好采样记录表（见附表1）。样品为生猪抗凝血（5mL，0.5%EDTA抗凝，不能使用肝素钠作为抗凝剂）或全血样品。 （二）样品包装 样品包装须符合农业农村部《高致病性动物病原微生物菌（毒）或者样本运输包装规范》要求。 （三）样品保存 在12h内检测的样品可暂存于4℃冰箱保存，超过12h不能检测的样品则置于-20℃或-70℃冰箱保存。已检样品应至少保存6个月，以备复查。 （四）样品运输 由专人将样品送至实验室，必要时安排专车送达，禁止使用公共交通工具。 （五）样品接收、开箱 接到样品时，首先应检查外包装有无损坏，并进行登记，如有破损应立即报告官方驻场兽医。不管外包装有无损坏，都要在外包装（冷藏箱或泡沫箱）四周喷洒消毒剂（含2.3%有效氯的次氯酸盐），作用30 分钟（为防止喷洒的消毒液干燥，中途再喷洒一次）。开箱后在样品箱内侧充分喷洒消毒剂，翻动冰袋，再次喷洒，保证所有角落和内壁均被喷洒消毒剂。样品箱的消毒、样品取出等动作应轻缓，以减少气溶胶产生。 （六）样品检测 1、严格按照试剂说明书的操作步骤进行检测。 2、熟悉操作，缩短检测过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏。 3、所有试剂开盖前都应先瞬时离心，避免液体飞溅；若液体不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面。 4、样品处理、配液、扩增严格分区，仪器、耗材等严禁交叉混用。 5、加样时严禁吹打。 6、荧光探针应避光保存，反应液现配现用，加入核酸后应尽快上机。 7、不要在荧光定量PCR管盖的采光部位做任何标记，不能用手接触PCR管 盖上的采光部位。 （七）原始记录 实验完成后应填写并保存相关检测原始记录（见附表2），检测原始记录、PCR图至少保存5年。 （八）检测报告 根据《关于全面开展生猪屠宰环节非洲猪瘟检测工作有关具体要求的通知》（川动监[2019]5号）要求，屠宰企业检测结果应规范出具《检测报告》（见附表3），载明对应的检疫合格证明编号、检测方法、检测日期、检测结果。检测报告必须经由报告编制人、驻场官方兽医和批准人（场点负责人）签字确认，加盖屠宰企业公章方为有效。检测报告一式两份，一份交企业所在县（市、区）动物疫病预防控制中心存档，一份为屠宰企业自行留存，保存期至少5年。 （九）结果处理 1、检测结果为阴性，同批生猪产品上市销售。 2、检测结果为阳性，应立即停止生产，将检测结果报告驻场官方兽医，并及时将阳性样品送所在县级动物疫病预防控制中心，待复核后再做处理。复核为阳性的按照《非洲猪瘟疫情应急实施方案（2019年版）》的规定采取应急处置措施处理。 三、屠宰企业非洲猪瘟检测实验室生物安全要求 （一）采样生物安全 1、正确穿戴好口罩、手套、鞋套、实验服等个人防护用品。 2、尽可能使用物理设备保定动物，既保证人的安全，又保证样品质量。 3、一头猪一个注射器或一个真空采血管，避免样品交叉污染。 4、采样结束，采样人员脱去个人防护用品，并对采样环境清洁消毒。 （二）检测过程中的生物安全 1、检查样品外包装有无损坏，并对外包装进行消毒。 2、注射器使用完后必须放置于专用废弃盒中待高压灭菌处理，高压灭菌前不得