生物分离工程第四章-沉淀分离法.pptVIP

2021/2/6 * 温度:低温有利于防止溶质变性;有利于提高收率（溶解度下降）;一般在0℃以下,操作时在冰盐浴中进行。 搅拌速度:散热 溶液pH值:通常选在等电点附近 离子强度:离子强度低有利于沉析,盐浓度一般在0.01~0.05mol/L 生物样品浓度: 蛋白质溶液的起始浓度0.5~2%,粘多糖起始浓度1~2%为宜。 稀:溶剂用量大,回收率低,但共沉淀作用小 浓:节省溶剂用量,共沉作用强,分辨率低 金属离子的助沉析作用:Zn2+、Ca2+ 5、有机溶剂沉淀过程的影响因素 2021/2/6 * （四）等电点沉淀法 定义—调节体系pH值,使两性电解质的溶解度下降,析出的操作称为等电点沉淀。 沉淀机理—蛋白质是两性电解质,当溶液pH值处于等电点时,分子表面净电荷为0,双电层和水化膜结构被破坏,由于分子间引力,形成蛋白质聚集体,进而产生沉淀。 盐离子的影响—使蛋白质的实际等电点发生“漂移”, pI偏离（±0.5） 与阳离子结合, pI升高 与阴离子结合, pI降低 2021/2/6 * 4、特点 沉淀条件温和; 不引入新的物质; 沉淀效果差。 由于在等电点附近,溶质仍然有一定的溶解度,等电点沉淀法往往不能获得高的回收率,因此等电点沉淀法通常与盐析、有机溶剂沉淀法联合使用。 2021/2/6 * （五）高分子聚合物沉淀法 定义—利用一些水溶性高分子聚合物使目的物溶解度降低而析出固相物的过程 沉淀机理 非离子型 如聚乙二醇（PEG）聚乙烯吡咯烷酮（PVP）和葡聚糖等,机理:类似于有机溶剂沉淀 离子型（海藻酸盐、聚丙烯酰胺盐、聚乙烯亚胺）:有机溶剂沉淀+架桥 2021/2/6 * PEG沉淀法机理: PEG分子亲水性强,优先水合,使得蛋白质等从溶剂中析出. 优点 1 体系的温度只需控制在室温条件下; 2 沉淀的颗粒往往比较大,同其他方法相比,产物比较容易收集; 3 PEG非但不会使蛋白质变性而且可以提高它的稳定性, 缺点 PEG比其他沉淀剂更难从蛋白质溶液中除去,为此需用超滤和液－液萃取来解决。 广泛应用于核酸、酶的分离 非离子型聚合物沉淀法 2021/2/6 * 3、特点 沉淀效果较好,条件温和 高聚物的残留 有一定的毒性（阳离子） 2021/2/6 * （六）金属离子沉淀法 定义—利用一些金属离子与目的物复合,降低其复合物的溶解度而析出固相物的过程 沉淀机理 由于金属离子能与蛋白质分子中的特殊部位起反应,从而降低蛋白质的溶解度。例如锌组胺酸残基中的咪唑基结合,使蛋白质的等电点转移,沉淀析出。 3. 分类 与羧基、胺及杂环等含氮化合物结合;如Mn2+、Fe2 + 、Zn2 + 、Cu2 +等 与羧基结合,不与胺及杂环等含氮化合物结合;如Ca2 + 、Ba2 + 、Mg2 + 、Pb2 +等 与巯基结合;如Hg + 、Ag + 、Pb2 +等 2021/2/6 * 3、特点 沉淀效果很好; 选择性好 容易使生物分子变性 复合物难分解 2021/2/6 * （七）选择性变性沉淀法 选择一定的条件使溶液中存在的某些杂质蛋白变性沉淀下来,而与目的物分开,这种分离方法就称为选择性变性沉淀法 在操作之前要对欲分离的物质中的杂蛋白等杂质的种类、含量及其物理化学性质等有比较全面的了解。 使用时需慎重!!!! 2021/2/6 * 选择性变性的方法 选择性热变性:对于α-淀粉酶等热稳定性好的酶,可以通过加热进行热处理,使大多数杂蛋白受热变性沉淀而被除去。 选择性酸碱变性:根据欲分离物质所含杂质在不同这pH条件下稳定性不同的特性,通过改变pH使杂蛋白变性沉淀而除去。 加入变性剂:根据欲分离物质所含杂质对表面活性剂、某些金属离子、有机溶剂敏感性不同,使得敏感性强的杂蛋白沉淀析出。操作一般在冰水浴中进行,以避免蛋白质变性。 2021/2/6 * 思考题 常用的沉淀法有哪几种?简述各自的沉淀机理。 生产中常用的盐析剂有哪些?其选择依据是什么? 影响盐析的主要因素有哪些? 有机沉淀法与盐析沉淀法相比有何优缺点? 2021/2/6 * 第四章 离心和沉淀分离法 2021/2/6 * 大部分工业生物分离的第一步往往是将不溶物质从发酵液中除去。这些不溶性固体的浓度和颗粒大小的变化范围很宽。 浓度可高达每单位体积含60%的不溶性固体,又可低至每单位体积仅含0.1%。 粒径的变化可以从直径约为1um的微生物,到直径为1mm的不溶性物质。 对于这些浓度较小,粒径较大,硬度较强的不溶物,我们可以采用过滤方法分离。 而有些发酵液,使用助滤剂有利于过滤分离,而还有一些发酵液则不行。 2021/2/6 * 问 题 固液分离:第一选择为过滤,