蛋白质工程制药汇总.pptVIP

or ab initio 有关糖尿病的描述见《现代文明病及其药物治疗与进展》（钱之玉） 血糖异常升高，但尿中可不出现酮体，血浆渗透压升高，容易昏迷死亡！ 血糖异常升高，但尿中可不出现酮体，血浆渗透压升高，容易昏迷死亡！ 千创百孔，增加了感染病原菌的危险！ 2021/2/11 * S2 蛋白质工程的基本技术 定点突变技术 随机突变技术 1、寡核苷酸引物介导 的定点突变 2、PCR介导的定点突变 3、盒式突变 4、易错PCR 5、DNA改组技术 2021/2/11 * 易错PCR 连续易错PCR（sequential error- prone PCR）:经以上一次PCR突变的基因很难获得满意的结果,于是将前一轮PCR扩增得到的有用突变基因作为下一轮PCR的模板,每次获得的突变累积起来,产生重要的有益突变。 可遗传的变化只发生在单一分子内部,属于无性进化（asexual evolution） 易错PCR（error-prone PCR）:利用缺乏修复功能的Taq酶,并设置容易引起出错的PCR反应条件,在扩增目的基因的同时引入碱基错配,导致目的基因随机突变——完全随机化 2021/2/11 * 易错PCR 优点:简便易行 不足:突变文库规模有限,有益突变少,后续筛选工作费力、耗时,只适用于较小的基因片段（ 800bp） 2021/2/11 * DNA改组技术 DNA改组（DNA shuffling）,又叫有性PCR（sexual-PCR）等,将单一基因随机片段化,这些片段自配对PCR扩增,由于易错PCR而引入大量随机突变,并在多次循环中重组,使基因在体外迅速进化,从中筛选到有益重组。 优点:体外定向进化,快速,高效（蛋白质、酶、抗体等） 2021/2/11 * DNA改组技术 2021/2/11 * 基因家族改组 DNA改组的不足:从单一基因出发,得到的随机点突变率很低,且有益突变的积累相对缓慢 在自然界中,不同物种同源基因本身就是具有非常丰富的变异,如果加以利用,就可以大大地加速基因在体外的进化速度——基因家族改组（DNA family shuffling） 2021/2/11 * 基因家族改组 2021/2/11 * S3 蛋白质工程制药实例 蛋白质工程在新药研究中的应用 胰岛素的蛋白质工程研究 2021/2/11 * 蛋白质工程在新药研究中的应用 1、提高药效活性 2、提高靶向性 3、提高稳定性、改善药代动力学特性 4、提高工业生产效率 5、降低蛋白药物引起的免疫反应 6、获得具有新功能的蛋白分子 7、获得特定蛋白的拮抗物或类似物 8、模拟原型蛋白分子结构开发小分子模拟肽类药物 2021/2/11 * 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的特效药 1、糖尿病 I型糖尿病: II型糖尿病: 胰岛素抵抗（IR）为主,伴胰岛素相对缺乏;以及胰岛素分泌缺陷,伴IR 由于细胞介导的胰岛B细胞自身免疫性破坏,导致胰岛素绝对缺乏 2021/2/11 * 胰岛素的蛋白质工程研究 闭环系统：自调控 竞争解吸附作用 2021/2/11 * 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的特效药 1、糖尿病 中国4000万,全球1.5亿患者 急性并发症: 酮症酸中毒（I,昏迷、死亡） 非酮症高渗性昏迷（II） 低血糖反应（心慌、手抖、饥饿、出冷汗） 2021/2/11 * 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的特效药 1、糖尿病 中国4000万,全球1.5亿患者 慢性并发症（可遍及全身各重要器官）: 心血管疾病、慢性肾病 视网膜病变、神经病变 2021/2/11 * 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的特效药 2、胰岛素 2021/2/11 * 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的特效药 2、胰岛素 胰岛素从猪、牛等动物的胰腺中提取,100Kg胰腺只能提取4-5g的胰岛素,其产量之低和价格之高可想而知。 2021/2/11 * 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的特效药 2、胰岛素 1982年,重组人胰岛素上市 ——第一个基因工程药物! 第一个完成序列测定的蛋白质（1958年） 第一个人工合成的蛋白质（1965年） Sanger 2021/2/11 * 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的特效药 2、胰岛素 每100L发酵液就能产生5g胰岛素,使其价格降低了30%-50%! 提取4-5g胰岛素需要100Kg胰腺 2021/2/11 * 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素在临床应用时存在的问题 1、在正常生理情况下胰岛素在体内是不断地分泌的,但不能连续不断地注射胰岛素 2、皮下注射胰岛素时,吸收得也很慢,注射后1.5-2小时,体内胰岛素水平还未能达到高峰,这就会导致高血糖;