胰蛋白酶比活力的测定.docxVIP

PAGE1 / NUMPAGES2 画面 出镜/不出镜 声音 画面效果 片头 胰蛋白酶比活力的测定 10秒左右课题片头 1 出镜 胰蛋白酶是一种水解酶，能催化蛋白质的水解，在食物消化中起着至关重要的作用。胰蛋白酶比活力是指每毫克胰蛋白酶所具有的酶活力单位数。酶的比活力在酶学研究中用来衡量酶的纯度，对于同一种酶来说，比活力越大，酶的纯度越高。利用比活力的大小可以用来比较酶制剂中单位质量蛋白质的催化能力，是表示酶的纯度高低的一个重要指标。我们本次实验就是要以N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE）为底物来测定胰蛋白酶的比活力。 2 不出镜 胰蛋白酶对于由碱性氨基酸的羧基与其他氨基酸所形成的肽键具有高度的专一性。因此，胰蛋白酶可以催化 N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE）水解生成N-苯甲酰-L-精氨酸（BA）。 PPT2 3 不出镜 BAEE在253nm处的紫外吸收要远低于BA，在胰蛋白酶催化BAEE水解生成BA的过程中，反应体系在253nm处的紫外吸收值会随之增加。因此，我们可以用253nm处光吸收值的增加量ΔA253nm来计算胰蛋白酶的酶活力。 PPT3 4 不出镜 在本实验条件下，以BAEE为底物，每分钟使ΔA253nm增加0.001所需要的酶量为1个酶活力单位。每毫克胰蛋白酶所具有的酶活力单位数即为胰蛋白酶比活力。据此，我们就可以利用ΔA253nm来计算得出胰蛋白酶比活力。 PPT4 5 不出镜 在本实验中，我们所用到的主要试剂包括底物2mmol/L的BAEE，1mg/ml的胰蛋白酶以及0.05mol/L pH7.8的Tris-Hcl缓冲液；用到的主要实验仪器为紫外分光光度计。 PPT5 6 不出镜 下面我们将介绍一下本实验的具体操作过程。 7 不出镜 1.取2支试管，分别标记为1号空白组和2号实验组，依次向其中加入底物BAEE 2.8ml，Tris-HCl缓冲液3ml，空白组中加入去离子水0.18ml，实验组加入待测的胰蛋白酶0.18ml，使得总体积均为5.98ml。 PPT6 8 不出镜 2.实验组中加入胰蛋白酶后立即混匀，在30s时间内向比色皿中准确加入3ml待测样品，用分光光度计将空白组在253nm处的光吸收值校正至0，而后开始记录时间，测定实验组的A253nm。 3.每隔1min读取 A253nm一次，至6min时终止读数。 4.计算每分钟平均 A253nm的增加值，进而计算得出胰蛋白酶活力单位数以及胰蛋白酶比活力。 PPT7 9 不出镜 具体计算方法如下。 PPT8 10 出镜 希望大家通过本次实验的学习，可以掌握测定胰蛋白酶比活力的方法，了解本实验的酶、底物和生成物的相关性质；进一步理解酶活力和比活力的概念；并掌握分光光度计的原理和使用方法。