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微生物常规鉴定技术 一、形态结构和培养特性观察１、微生物的形态结构观 察主要是通过染色， 在显微镜下对其形状、 大小、排列方式、 细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等） 及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性， 根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物 的目的。２、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫 菌落（colony ）。不同微生物在某种培养基中生长繁殖， 所形 成的菌落特征有很大差异，而同一种的细菌在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。 ，以此可以对不同微生物加以区别鉴定。因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别 中的一项重要内容。 １）细菌的培养特征包括以下内容： 在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶 性还是脂溶性） 、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘 特征及迁移性等。 在液体培养中的表面生长情况 （菌膜、环）混浊度及沉淀等。半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。（图３－８） 图３－８ 细菌的培养特征 1.点状 2.圆形 3. 丝状 4. 不规 则形 5.假根状 6. 纺锤状 7.扁平 8.隆起 9. 凸起 10. 垫状 11. 脐状 12. 边缘整齐 13. 波状 14. 裂片状 15. 啮蚀状 16. 丝 状 17. 卷发状 18. 丝线状 19. 刺毛状 20. 串珠状 21. 疏展状 22. 树根状 23. 假根状 24. 丝状 25. 串珠状 26. 乳头状 27. 绒 毛状 28. 树根状 29. 量杯状 30. 萝卜状 31. 漏斗状 32. 囊状 33. 层状 34. 絮状 35. 环状 36. 蹼状 37. 膜状 ２）霉菌酵 母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基 上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大且厚。液 体培养也和细菌相似， 有均匀生长、 沉淀或在液面形成菌膜。 霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基里， 菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。霉菌的基内菌丝、气生菌 丝和孢子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心，正面 和背面颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无 色，基内菌丝褐色。霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状 和蜘蛛网状菌落。二、生理生化试验 微生物生化反应是 指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴 别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生 化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。 微生物检 验中常用的生化反应有：１、糖酵解试验 不同微生物分 解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利 用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。 试 验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。接种后，置 36± 1.0 °C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸） ，小倒管中有无气泡，微小 气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力， 若有动力、培养物可呈弥散生长。 本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的 鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。一般常用的指示 剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和 An-drade 指示剂。２、 淀粉水解试验 某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。 试验方法：以 18~24h 的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区接种，试验数种培养物）或直接 移种于淀粉肉汤中， 于 36± 1°C培养 24~48h ，或于 20°培养 5 天。然后将碘试剂直接滴浸于培养表面， 若为液体培养物，则加数滴碘试剂于试管中。立即检视结果，阳性反应（淀粉 被分解）为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无 色透明环、或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透明环或肉汤 呈深蓝色。 淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果 与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和 pH 等均有一定关系。培养基 pH 必须为中性或微酸性，以 pH7.2 最适。淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用时 制备为妥。３、 V-P 试验 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培 养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰 甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰， 二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称 V－P（ +）反 应。 试验方法： １） O’ Meara 氏法：将试验菌接种 于通用培养基， 于 36± 1°C培养 48h ，培养液 1ml 加 O’ Meara 试剂（加有 0.3% 肌酸 Creatine 或肌酸酐 Cre