葡萄的组培快繁技术.docVIP

葡萄的组织培养技术 湖北第二师范学院 ?葡萄外植体的采集和消毒 1.1外植体是从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。 在该组织培养屮，用的培养材料是茎尖，通常切块在0.5厘米左右，如果为 培养无病毒苗而采用的培养材料通常仅取茎尖的分生组织部分，其长度在0.1毫 米以下。 葡萄脱毒过程屮，外植体的大小与脱毒率高低成相关性。所以选取外植体的 大小适宜在葡萄脱毒过程屮应要常握好?葡萄在茎尖培养屮，光的效果通常要比 喑培养好。一般多采用光培养的方式，试管苗培养适宜的温度是25+/-2度 1.2防止外植体带菌 1.2.1选择好外植体采集时期和采集部位 1.2.1.1外植体采集以春秋为宜； 1.2.1.2优先选择地上部分作为外植体； 1.2.1.3阴雨天勿采，晴天下午采集； 1.2.1.4采前喷杀虫剂、杀菌剂或套塑料袋。 1.2.2室内或无菌条件下进行预培养。 1.2.3外植体严格灭菌灭菌效果实验多次灭菌和交替灭菌 仁3培养材料的消毒 1.3.1先将材料用流水冲洗干净，最后一遍用蒸馆水冲洗，再用无菌纱布或吸水 将材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小块。 1.3.2在无菌坏境屮将材料放入70%洒精屮浸泡30-60秒。 1.3.3再将材料移入漂白粉的饱和液或0.01 %升汞水消毒10分钟。 1.3.4取出后用无菌水冲洗三、四次。 1.4制备外植体 将己消毒的材料，用无菌刀、剪、银等，在无菌的环境下，剥去芽的鳞片、 嫩枝的外皮和种皮胚乳等，叶片则不需剥皮「然后切成0.2-0.5厘米厚的小片, 这就是外植体。 .培养基的成分及制备 2.1培养基的成分 组织培养过程屮，外植体生长所需的营养和生长因子，主要是由培养基供应 的。因此，培养基屮应包括植物牛长必需的16种营养元索和某些生理活性物质。 所有这些物质，可概括为5大类： 2.1.1无机营养物 培养基的各种盐类小均含有氮、磷、钾、钙、镁、硫、铁、硼、锚、铜、锌、 钳、氯。无机氮nJ以两种形式供应，即硝态氮和较态氮。有些培养基以硝态氮为 主，另一?些以鞍态氮为主，多数二者兼而有之。铁往往以无机铁供应，如硫酸亚 铁，为了防止沉淀，H前皆用螯合铁，即硫酸亚铁加乙二胺四乙酸钠配成。 2.1.2有机物质 主要有两类：一是作为有机营养物质，为植物细胞提供碳、氢等必要元素， 如糖类、氨基酸及其酰胺类；另一类是一些生理活性物质，在植物代谢屮起一定 作用，如硫胺索、毗哆醇、烟酸、生物索、肌醇、单核甘酸及其碱基。 2.1.3植物生长刺激物质 激素及激素浓度直接影响着愈伤组织的状态，质地和分散性。以MS为基本 培养基，附加适量的细胞分裂素6-BA和NAA。最适的培养基配方为 MS+6-BA0.5-3.0mg/L和NAA0.01400mg/L,且培养基屮添加蔗糖有增加从生 芽数量的作用。 2.1.4其他附加物 这些物质不是植物生长所必需的，但对细胞生长有益。琼脂心9玄「）是|古I休培 养基的必要成分，本身并不提供任何营养?琼脂条的用量在6-10g/LZ|TiJ,抗 生物质，包括青霉素、链霉素、庆大霉素等，用量在5—20mg/L之间。添加抗 生物质可防止菌类污染，减少培养屮材料的损失，尤其对大量通气长期培养，效 果更好。对于刚感染的组织材料，可向培养基屮注入5%—10%的抗菌索。应为 注意抗生素对植物组织的生长也有抑制作用，值得提醒的是，在工作屮不能以为 有了抗菌素，血放松灭菌播施。 3.1.5其他对生长有益的未知复合成分 常用的为植物的天然汁液，如酵母提取物等。他们的作用是供给--些必要的微 量营养成分、牛理活性物质和牛长激索物质等. 以下为MS培养基配方: 21S培养垄 成分 分子锻 使川浓度（mg/L） 俏酸钾 KNO3 101.11 1900 硝酸饮 NH4NO3 80.04 1650 人量元素 说酸二 虫钾 KH2PO4 136.09 170 硫酸镁 MgSC)4.7H2O 246.47 370 氣化钙 CaC12.2H2O 1(47.02 440 微屋元索 碘化钾 KI 166.01 0.83 硼酸 H3BO3 61.83 6.2 硫酸镒 MnS(J4.4H2O 223.01 22.3 硫酸锌 ZnSO4.7 1120 287.54 8.6 钿酸钠 Na2MoO4.2 H2O 241.95 0.25 硫酸铜 CuSO4.5 H2O 249.68 0.025 氯化钻 CoC12.62 237.93 0.025 铁盐 乙二胺四匕酸二钠 Na2.EDTA 372.25 37.3 硫酸亚铁 FcSO24.7H2O 278.03 27.8 有机成分 肌醇 100 廿氨酸 2 盐酸硫胺素 VB1 01 盐酸毗哆醇 VB6 0.5 烟酸 VB5或VPP 0.5 sucrose 342.31 30g/L 琼脂 agar 7