氨基酸的薄层层析.docVIP

精品整理 氨基酸的薄层层析 【实验原理】 聚酰胺薄膜层析是60年代以后发展起来的一种新的层析方法，特别适用于氨基酸及其衍生物的分析。具有灵敏度高、分辨率强、操作方便快捷等特点。 聚酰胺是一类化学纤维素原料，即锦纶（尼龙）。由乙二酸和乙二胺聚合而成的，称锦纶66。 由于分子中含有大量的酰胺基团，故称聚酰胺。聚酰胺薄膜是在涤纶片基上涂上一层锦纶制成的。聚酰胺对许多极性物质有吸附作用，这是由于聚酰胺的-C=O和-NH- 能与被分离物质的一定基团形成H键。如酚类（黄酮类、鞣质）和酸类（氨基酸、核苷酸）能以其羟基与酰胺键的羰基形成H键。在层析过程中，当样品随流动相通过聚酰胺薄膜时，由于聚酰胺与各极性分子产生H键吸附能力的强弱不同，从而可将样品中各成分分离。 物质分离后，层析点在图谱上的位置，即在滤纸上的移动速率，用Rf来表示。 在一定条件下，每个物质都有特定的Rf值，因此，用Rf可鉴定不同的物质。 无色物质的层析图谱可用光谱法（紫外照射）或显色法鉴定。氨基酸层析图谱常用茚三酮作显色剂。本实验利用单向上行层析法鉴定氨基酸。 【实验试剂和器材】 (一) 试剂 1. 氨基酸标准液(10mg/ml)：三种氨基酸是赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸，分别配成上述浓度的溶液。 2. 氨基酸混合液（每种氨基酸5mg/ml） 3. 展层剂：正丁醇：12％氨水：95％乙醇＝13: 3: 3（V/ V） 4. 0.1%茚三