临床pcr试验室基本设置要求讲解.pptVIP

临床 PCR 原理及实验室基本设 置要求 主要内容 ? PCR 的原理及特点 ? PCR 实验室布局设置 ? PCR 实验室仪器设备 一、 PCR 原理及特点 PCR 技术的原理 在微量离心管中 , 加入适量的缓 冲液 , 微量的模板 DNA, 四种 dNTP,Taq 酶 , 一对引物 , 通过高温变性、低温退 火和中温延伸三个阶段为一个循环 , 每次循环使特异区段的核酸拷贝数放 大一倍 , 经过 30 次循环 , 最终使基因放 大数百万倍 PCR 原理与特点 1. PCR 反应体系 : DNA 聚合酶 DNA 靶序列 两端引物 脱氧核苷酸 dNTPs 缓冲液 2. DNA 的合成方向 5 3 3. Taq DNA 聚合酶的作用 4. PCR 循环： 变性 退火 延伸 Mg 2+ dCTP dGTP dTTP dATP Taq DNA 聚合酶 Primer 加热 变 性 复 性 复 温 DNA 的变性和复性 加热或强酸、碱性作用 可以使 DNA 双螺旋的氢键 断裂 , 双链解离 , 形成单 链 DNA, 这称为 DNA 变性 解除变性的条件后 , 变性 的单链可以重新结合起 来 , 形成双链 , 这称 DNA 复 性 , 也叫退火。 PCR 循环 第一步 － 变性 （９３～９８℃） PCR 循环 PCR 循环 第二步 － 退火 （３７～６５℃） PCR 循环 PCR 循环 第三步 － 延伸 （７０～７５℃） PCR 循环 第一个 PCR 循环 － 靶序列完成复制 PCR 循环 循环次数 DNA 的链数 1 2 1 2 2 2 2 4 3 2 3 PCR 循环次数与 DNA 产量关系 PCR 循环 PCR 特点：高效扩增、 忠实复制 ? 灵敏度高 ? 快捷 ? 简便 ? 对样品纯度要求低 ? 可以相对定量 PCR 反应的特点 二、 PCR 实验室布局设置 生物安全二级实验室 目的 保护操作人员 保护环境 保护样品 临床 PCR 实验室工作流程 试剂储存和准备 标本制备区 扩增区 产物分析区 PCR 实验室平面设计 ○ 在入口处设 缓冲间○缓冲间比专用走廊更有意义。 有问题！