实时荧光定量PCR技术 .ppt

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;提纲:?? ;精品资料; 你怎么称呼老师? 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点,你是否会认为老师的教学方法需要改进? 你所经历的课堂,是讲座式还是讨论式? 教师的教鞭 “不怕太阳晒,也不怕那风雨狂,只怕先生骂我笨,没有学问无颜见爹娘 ……” “太阳当空照,花儿对我笑,小鸟说早早早……”;实时荧光定量PCR定义:; 与普通PCR的区别 ;2020/11/29;2020/11/29;2020/11/29;荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值,它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上,一般荧光域值的设置是 基线(背景)荧光信号的标准偏差的 10 倍。 每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数被称为 CT 值( threshold value )。 ;; 定量PCR的数学原理 ;; 斜率与扩增效率;; 荧光定量PCR化学原理 ;1、SYBR Green 法;SYBR Green 熔解曲线分析 ;SYBR Green法优缺点;2、TaqMan探针法 ;TaqMan作用机理 ; TaqMan法优缺点 ; Real-time PCR 方法应用 ; ?绝对定量(Absolute Quantification,AQ) 病原体检测 转基因食品检测 基因表达研究 ?相对定量(Relative Quantification,RQ) 基因在不同组织中的表达差异 药物疗效考核 耐药性研究 ; 绝对定量与相对定量的定义 ;绝对定量通过标准品定量;绝对定量:从荧光到拷贝数 ; 相对定量通过内标定量 ; 相对定量:参照因子Calibrator ; 相对定量分析方法1 -ΔΔCt ; 相对定量分析方法2:双标准曲线法 目标基因与内参基因扩增效率不同; ; 样品 ; 标准品 ; 标准品梯度稀释方法 ; 复管测试 ●样品和标准品都要重复 ●重复次数须遵循统计学要求 ;平台PCR仪介绍;Rotor gene 6500HRM;MJ Opticon 2; 谢谢!

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