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示差折光检测器原理 ? 检测器的光路是由光源、凸镜、检测池、 反射镜、平板玻璃、双光敏电阻等主要 部件组成，检测池有参比，测量两个池 室，它们对光路来说是串联的。 Waters 液相色谱维护保养 以下课件是我在使用、操作、高效液 相色谱仪十年中积累的经验，以及集 合外部学习的经验所写，如有讲的不 好、错误之处，请大家及时指出，我 们共同学习！ 质检： Waters 高效液相色谱常见故障与解 析 第一部分常用术语 第二部简述 HPLC 的组成 第三部分主要讲液相常见故障与解析 | 第四部分简谈示差检测的原理 第五部分：色谱柱的维护与保养 第一部分术语 ? 1 、液相 色谱法 ：就是用液体作为 流动相 的 色谱法。 ? 2 、固定相：在色谱法中，静止不动的一相 （固体或液体）称 为固定相 ? 3 、流动相：能运动的一相（一般是气体或 液体）称为流动相 ? 4 、色谱图：色谱柱流出物通过检测器时所 产生的响应信号对时间的曲线图。纵坐标 为信号强度（通常我们所说的样品浓度）， 横坐标为保留时间。 5 、基线：在无组分通过色谱柱时，检测器 的噪音随时间变化而产生的曲线 术语 ? 6 、基线噪声 : 没有溶质通过检测器时，检测器 输出信号的随机扰动变化。（就是没有打进样 品而直接查看基线时所产生的杂峰） ? 7 、基线漂移：基线随时间的增加朝单一方向 的偏离称为漂移。反映的是信号连续的递增和 递减。产生原因：电源电压不稳、色谱系统未 达到平衡、固定相流失、流动相的变化、温度 和流量的波动 术语 ? 8 、色谱峰：色谱柱流出组分通过检测器时产 生的响应信号的微分曲线。 ? 9 、峰底：峰的起点与终点间的直线 ? 10 、峰高：在峰的两侧拐点处所作切线与峰底 相交两点之间的距离。 11 、半峰宽（ W1/2 ）：通过峰高的中点做平 行与峰底的直线，与其峰两侧相交两点间的距 离。 12 、峰面积（ A ）：峰与峰底间的面积，又称 作响应值。 ? 13 、拖尾峰：后沿较前沿平缓的不对称峰。 ? 14 、前伸峰：前沿较后沿平缓的不对称峰 术语 ? 15 、死时间（ t0 ） : 不被固定相滞留的组分， 从进样到出峰最大之所需的时间 ? 16 、保留时间（ tR ）：组分从进样到出峰最 大之所需的时间。 ? 17 、死体积（ V0 ）：不被固定相滞留的组分， 从进样到出峰最大之所需的流动相的体积 ? 18 、柱外体积 ：从进样系统到检测器之间色 谱柱以外的液路部分中流动相所占有的体积。 ? 19 、淋洗体积 ：从进样开始计算的通过色谱 柱的实际淋洗体积 术语 ? 20 、反相色谱柱 ? 反相色谱填料常是以硅胶为基础，表 面键合有极性相对较弱的官能团的键合 相。反相色谱所使用的流动相极性较强， 通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合 物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强 组合最先被冲出，而极性弱的组份会在 色谱柱上有更强的保留。常用的反相填 料有 C18 （ ODS ）、 C8 （ MOS ）、 C4 （ B ） 术语 ? 21 、排阻色谱又称凝胶色谱或凝胶渗透色谱， 是利用被分离物质分子量大小的不同和在填料 上渗透程度的不同，以使组分分离。它类似于 分子筛的作用，按分子大小进行分离。试样进 入色谱柱后，随流动相在凝胶外部间隙以及孔 穴旁流过。在试样中一些太大的分子不能进入 胶孔而受到排阻，因此就直接通过柱子，首先 在色谱图上出现，一些很小的分子可以进入所 有胶孔并渗透到颗粒中，这些组分在柱上的保 留值最大，在色谱图上最后出现。例如：我们 常用的 ks-802 色谱柱 第一部分术语 22 、面积归一法：将所有峰的面积总和定 为 1 ，测量各峰的面积和色谱图上除溶剂 峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积 占总峰面积的百分率。是包含水分在内 的一个计算结果。 第一大部分术语 23 . 面积外标法：外表法就是用标准品的峰 面积 或峰高与其对应的浓度做一条标准曲线 , 测出 样品的峰 面积 或峰高 , 在标准曲线上查出其对 应的浓度 , 这是最常用的一种定量方法 通过进标样建立一个校正曲线（一般是 6 针标 样）。校正曲线的横坐标是标样的浓度（含 量），纵坐标是峰 面积 ；校正曲线就相当于： Y=aX+b 的公式。校正曲线建立好后样品的峰 面积 带入方程就可以得到相应的浓度（含量）。 数据分析 系统 输液系统 泵以及流 动相 进样系统 进样阀 分离系统 - 色谱柱 检测系统 11 第二部分 HPLC 的组成 数据处理系统 Wat