生物大分子4核酸.pptVIP

2021/3/23 * 真核 双链线性DNA（dsDNA） 2021/3/23 * 2021/3/23 * 第四节 RNA的结构 一、结构特点 碱基组成 A、G、C、U （A＝U/G≡C） 稀有碱基较多,稳定性较差,易水解 多为单链结构，少数局部形成螺旋 分子较小 分类 mRNA（hnRNA 核不均一RNA） tRNA rRNA （snRNA/asRNA） 少数RNA病毒 2021/3/23 * 二、tRNA 占RNA总量的15％ 一种氨基酸对应最少一种RNA 分子量25000左右,大约由70－90个核苷酸组成,沉降系数为4S左右。 分子中含有较多的修饰成分。 3-末端都具有CpCpAOH的结构。 2021/3/23 * tRNA的三级结构 2021/3/23 * 三、rRNA 占RNA总量的80％ 原核生物 真核生物 核糖体 rRNA 核糖体 rRNA 30s 70s 50s 16s 5s 、23s 40s 80s 50s 18s 5s、5.8s、28s 2021/3/23 * 四、mRNA和hnRNA 占细胞总RNA的3％～5％ 真核细胞mRNA的3‘-末端有一段长达200个核苷酸左右的聚腺苷酸(polyA),称为 “尾结构” ,5’ -末端有一个甲基化的鸟苷酸，称为” 帽结构“ 。 2021/3/23 * 第五节 核酸的性质 一、一般的理化性质 两性解离 / 一般呈酸性（在中性溶液中带负电荷），微 溶于水，不溶于有机溶剂 线性大分子（粘度高。抗剪切力差） 可用电泳或离子交换（色谱）进行分离 室温条件下，DNA在碱中变性，但不水解，RNA水解 加热条件下，D－核糖＋浓盐酸＋苔黑酚 绿色 D－2－脱氧核糖＋酸＋二苯胺 蓝紫色 2021/3/23 * 二、核酸的紫外吸收特性 在核酸分子中,由于嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键体系,因而具有独特的紫外线吸收光谱，一般在260nm左右有最大吸收峰，可以作为核酸及其组份定性和定量测定的依据。 以A260/A280进行定性、定量 DNA和RNA溶液中加入溴化乙锭（EB），在紫外下发出荧光 2021/3/23 * 三、核酸的变性、复性与分子杂交 1. 变性 概念 稳定核酸双螺旋次级键断裂,空间结构破坏,变成单链结构的过程。核酸的的一级结构(碱基顺序)保持不变。 变性表征 生物活性部分丧失、粘度下降、浮力密度升高、紫外吸收增加（增色效应） 变性因素 pH（11.3或5.0） 变性剂（脲、甲酰胺、甲醛） 低离子强度 加热 2021/3/23 * DNA的变性过程是突变性的,它在很窄的温度区间内完成。因此,通常将紫外吸收的增加量达最大量一半时的温度称熔解温度，用Tm表示。 一般DNA的Tm值在70-85?C之间。DNA的Tm值与分子中的G和C的含量有关。 G和C的含量高，Tm值高。因而测定Tm值，可反映DNA分子中G, C含量，可通过经验公式计算:（G+C)%=(Tm-69.3)X2.44 2. 热变性和Tm 2021/3/23 * 2021/3/23 * 3. 核酸的复性 变性核酸的互补链在适当的条件下,重新缔合成为双螺旋结构的过程称为复性。 DNA复性后,一系列性质将得到恢复，但是生物活性一般只能得到部分的恢复，具有减色效应。 将热变性的DNA骤然冷却至低温时，DNA不可能复性。变性的DNA缓慢冷却时可复性，因此又称为“退火”。 退火温度＝Tm－25℃ 复性影响因素 片段浓度/片段大小/片段复杂性（重复序列数目）/ 溶液离子强度 2021/3/23 * 2021/3/23 * 4.分子杂交 DNA单链与在某些区域有互补序列的异源DNA单链或RNA链形成双螺旋结构的过程。这样形成的新分子称为杂交DNA分子。 核酸的杂交在分子生物学和遗传学的研究中具有重要意义。 Southern 杂交（Southern bolting） Northern 杂交（Northern bolting） Western 杂交 （Western bolting） 2021/3/23 * 2021/3/23 * 一、选择题1．自然界游离核苷酸中,磷酸最常见是位于:A．戊糖的C-5′上 B．戊糖的C-2′上 C．戊糖的C-3′上D．戊糖的C-2′和C-5′上 E．戊糖的C-2′和C-3′上 2．可用于测量生物样品中核酸含量的元素是:A．碳 B．氢 C．氧 D．磷 E．氮 3．下列哪种碱基只存在于RNA而不存在