生理指标测定实验方案汇总模板.docxVIP

资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 预测指标 : 1.抗氧化酶系统、 MDA 可溶蛋白、 超氧阴离子自由基 3.叶绿素、 类胡萝卜素 4.可溶性糖 5.游离氨基酸 6.过氧化氢 谷胱甘肽、 ASA 1. 抗氧化酶系统、 MDA 酶活测定 试剂 : PBS 缓冲液 0.05M( pH 7.8) : 取 0.663g NaH2PO4 ·2H2O 和 16.384g Na2HPO4·12H2O, 加 PVP10g, 并加 EDTA 或者 EDTA 盐, 使其浓度 2mM, 加蒸馏水定容至 1L 。用前冰箱或冰上预冷。样品制备 鲜样 0.1-0.5g 加入 1 ml 磷酸缓冲液 ( 0.05M, pH 7.8) , 稍许石英砂 , 研磨成匀浆 ; 移入 10 ml 离心管中 , 再用 4ml 磷酸缓冲液分两次洗涤研钵并全部转入离心管中 ; 10000 ×g 4℃下离心 20 min; 上清夜贮于4℃冰箱中保存备测。同时称取鲜样一份 (0.1g 左右 )烘干称重。 SOD ( λ =560nm) 试剂配制 : 1LPBS Met 1.93973g 缓 冲 NBT [ 氮蓝四唑 ] 0.061323g 液 中 EDTA-Na2 0.0037224g 资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 加入  核黄素  0 实验步骤  : 2.725mL 2.75mL  反应液＋反应液＋  250uL 250uL  蒸馏水＋ 蒸馏水 (  25uL 酶液 光照作为  【样品管】 100%CK) 【照光对照 管】 2.75mL 反应液＋ 250uL 蒸馏水 ( 黑暗作为调零 ) 【空白调零管】 4000lx 日光灯下反应 20 分钟 , 560nm 比色。反应温度 25~35℃。 已知 SOD 活性单位以抑制 NBT 光化还原的 50％为一个酶活性单 位 表 示 按 下 式 计算 SOD 活 性 : SOD 总 活 性 ＝ ( Ack － AE) *V/( 0.5*Ack*w*Vt) ( 式中 SOD 总活性以鲜重酶单位每克表示 , Ack 为照光对照管的吸 光度 , AE 为样品管的吸光度 , V 为样品液的总体积 ml, Vt 为测定时 样品用量 ml, w 为样品鲜重 g) ※※※ 【空白调零管】 可在光反应快结束前配制并用黑色纸或铝箔包裹以避光。【样品管】和【照光对照管】在光反应快结束后至测定前应避光处理。 POD ( λ =470nm 比色 ) 试剂配制 : 1.5%愈创木酚 ( 1.5ml 愈创木酚 , 用蒸馏水定容到 100 ml) 300uM 的 H2O2: 取 30％的 H2O2 1.53ml, 用蒸馏水定容到 50 ml; 实验步骤 : 100ul 酶液 +2700ulPBS+100ul 愈创木酚 +100ul H2O2, 于普通比色皿 , 轻轻摇匀 2-秒 , A470 动力学测定 1 分钟。选择时间段较为笔直的曲 线斜率为 activity, 此后测定均参考该时间段。 结果计算 : POD(mmol/g)=activity × A × V×a/(E× w) A 反应液总体积 /ml; V 提取液总体积 /ml; a 测定液体积 /ml; w 材料鲜 重/g; E 吸光系数 /mM ·cm-1 资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 CAT( 240nm 比色 ) 试剂配制 : 300uM 的 H2O2: 取 30％的 H2O2 1.53ml, 用蒸馏水定 容到 50 ml; 实验步骤 : 100ul 酶液 +2800ulPBS+100ul H2O2, 于石英比色皿 , 轻轻摇匀 2-秒, A240 动力学测定 1 分钟。选择时间段较为笔直的曲线斜率为 activity, 此后测定均参考该时间段。 结果计算 : CAT (mmol/g)=activity × A× V × a/(E× w) APX( λ=290nm 比色 ) 试剂配制 : 7.5mM 的抗坏血酸 (AsA): 66mg AsA 用蒸馏水定容到 50 ml; 300uM 的 H2O2: 取 30％的 H2O2 1.53ml, 用蒸馏水定容到 50 ml; 实验步骤 : 100ul 酶液 +2700ulPBS+100ul AsA +100ul H2O2, 于石英比色皿 , 轻 轻摇匀 2-秒, A290 动力学测定 1 分钟。选择时间段较为笔直的曲线斜率为 activity, 此后测定均参考该时间段。 结果计算 : CAT (mmol/g)=activity × A× V × a/(E× w) B. 丙二醛 ( MDA)